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脱落细胞检查技术和 临床应用评价 第一节　标本采集和涂片制作方法 一、标本采集 （一）直视采集法 身体直视部位直接用刮片刮取、吸管吸取、刷洗、刷取等取细胞制片。 （二）自然分泌液的采集法 　　1．痰液涂片检查： 　　2．尿液涂片检查： 　　3．乳头溢涂片检查： 　　4．前列腺液涂片检查。 （三）灌洗洗 　　 向空腔器官或腹腔、盆腔（剖腹探查时）灌注一定量生理盐水冲洗，使其细胞成分脱落于液体中，收集灌洗液离心制片，作细胞学检查。 （四）磨擦法 　　 利用磨擦工具在病变部位磨擦，将擦取物直接涂片。常用磨擦工具有海棉磨擦器、线网套、气囊等。可分别用于鼻咽部、食管和胃部病灶的取材。 　 （五）针穿抽吸法 　　当有胸腔、腹腔、心包腔及关节腔积液时，可用针穿抽吸部分积液作细胞学检查。此外某些深部组织器官，如淋巴结、甲状腺、软组织、肝等亦可作细针穿刺吸取部分细胞进行涂片诊断。 二、涂片制作方法 （一）涂片前准备工作及涂片方法 　　1．涂片前准备工作 　　（1）取材后尽快制片。 　　（2）避免挤压以防止损伤细胞。 （3）涂片要均匀，厚薄要适度。 　　（4）玻片要清洁。 （5）涂片前先在玻片上涂薄层粘附剂，　 （6）至少涂两张玻片，以避免漏诊。 （7）及时玻片编号 。 2．涂片制备方法 　　（1）推片法：用推片用30度夹角将玻片上检液轻轻向左推。 　　（2）涂抹法：由玻片中心经顺时针方向外转圈涂抹；或从玻片一端开始平行涂抹。 　（3）压拉涂片法：将标本夹于横竖交叉的两张玻片之间，然后移动两张玻片，使之重叠，再边压边拉，获得两张涂片。 （4）吸管推片法： （5）喷射法： （6）印片法：将切取的病变组织用手术切开，立即将切面平放在玻片上，轻轻按印。此方法为活体组织检查的辅助方法。 （二）涂片的固定 固定的目的 是保持细胞自然形态，防止细胞自溶和细菌所致的腐败。 固定原理 固定液能沉淀和凝固细胞内蛋白质和破坏细胞内溶酶体酶，使细胞保持自然形态，结构清晰，易于着色。 1．固定液： 细胞学检查常用的固定液有下列三种： （1）乙醚酒精固定液：该固定液渗透明性较强，固定效果好，适用于于一般细胞学常规染色。 （2）氯仿酒精固定液：又称卡诺氏固定液。其优点同上。 （3） 95%酒精固定液：适用于大规模防癌普查。制备简单。但渗透作用稍差。 　2．固定方法 　（1）带湿固定：适用于巴氏或HE染色。痰液、阴道分泌物及食管拉网涂片等。 （2）干燥因定：适用于稀薄标本如尿液、胃冲洗液等。 　3．固定时间：一般为15-30min。 （三）涂片的染色 1．染色的目的： 是借助于一种或多种染料，使组织和细胞内结构分别着不同的染色。 2. 组织细胞染色原理：　　 染色的物理作用是利用毛细管现象，渗透、吸收和吸附作用，使染料的色素颗粒牢固地进入组织细胞，并使其显色。 　 染色的化学作用是渗入组织细胞的染料与其相应的物质起化学反应，产生有色的化合物。 各染料都具有两种性质，即产生颜色；和与被染组织形成亲和力。这两种性质主要由发色基因和助色基因所产生的。 发色基团：苯的衍生物具有可见光区吸收带。其产生颜色的醌式环称为发色基团。 助色基团：是一种能使化合物发生电离作用的辅助原子团（酸碱性基团）。它能使染色的色泽进一步加深，并使其与被染色组织具有亲和力。 2．常用染色方法： （1）巴氏染色法： 本法染色特点是细胞具有多色性颜色，色彩鲜艳多彩。 （2）苏木精—伊红（HE）染色法： 该方法染色透明度好，核与胞质对比鲜明。 （3）瑞特—吉姆萨染色法； 胞质内颗粒与核染色质结构显示较清晰。 第二节　显微镜检查 一、显微镜观察方法 1.检查涂片前必须严格核对涂片编号。 2.了解送检单上填写的全部资料。 3.阅片要全面、认真、细心, 由面到点观察。 4. 显微镜观察时必须按顺序视全张涂片，用推进器从左至右，自上而下移动。 两种阅片顺序 二、诊断报告方式 1．直接法：根据细胞学检查结果，直接写出关于疾病的诊断。 　2．分级法：将涂片中细胞学检查发现的细胞变化，用分级方式表示。它的优点是能真实地反映细胞学所见。 目前有三级、四级、和五级三种分类方法。五级分类法过于繁琐，实际应用中较难掌握。因此国内仍常用三级或四