模块四 常见植物组培方法与易发问题处理.ppt

模块四 常见植物组配方法与易发问题处理 单元一 器官培养（一） 知识目标 一般掌握离体根培养的取材部位和培养基的选择； 掌握茎尖培养的种类和操作步骤； 掌握茎段培养中材料的选择、处理及培养基的调整； 学习提示 多动手，勤实践； 多比较，多联想，勤归纳； 手、口、脑并用，学做合一。 实际应用 　　　植物器官培养可利用茎、叶和花器培养建立的试管培养物，进行名优特新品种的快速繁殖；利用茎尖培养可以得到脱毒试管苗，解决品种的退化问题，提高产量和品质；将植物器官作诱变处理，利用器官培养可得到突变株，进行细胞的突变育种。 任务讲解 一、根无性繁殖系的建立 　1.外植体 　　　根的培养材料一般来自无菌种子发芽产生的幼根或植株根系经灭菌处理后的切段。 一、根无性繁殖系的建立 2.根无性繁殖系的建立　 将种子进行表面消毒，在无菌条件下萌发，待根伸长后从根尖一端切取长1.2cm的根尖（或植株的根系经表面灭菌后）接种于培养基中。这些根的培养物生长甚快，几天后发育出侧根。待侧根生长约一周后，即切取侧根的根尖进行扩大培养，它们又迅速生长并长出侧根，又可切下进行培养，如此反复，就可得到从单个根尖衍生而来的离体根的无性繁殖系。这种根可用来进行根系生理生化和代谢方面的实验研究。 二、培养方法 一、植株再生培养 　根的离体培养也可以用来再生植株。 　第一步诱导形成愈伤组织； 　第二步在再分化培养基上诱导芽的分化 　在愈伤组织上分化成小植株。 　需要注意的是，愈伤组织如果先分化形成根则往往抑制芽的形成。 再生培养视频 三、影响因素 1. 植物种类 2. 培养基　多为浓度低的White培养基，许多植物在1/2MS培养基上能生根。糖的使用浓度应稍低，如玫瑰生根蔗糖为2%。 3. 生长物质 培养基中添加适宜浓度的生长素有利于根的形成和生长，常用生长素为IAA、NAA、IBA，浓度范围一般为0.0-1.0mg/L。 三、影响因素 4. pH 根的培养适宜的pH范围为5.0～6.0， 5. 光照大多数人认为，黑暗有利于根的形成。试管苗的生根一般无需考虑光照的影响，有时加一点活性炭可减弱光照，对植物的生根比较有利。 6. 温度生根温度一般控制在16～25℃。 第二节　茎尖培养 意义： 茎尖不仅生长速度快、繁殖率高、不易产生遗传变异，而且是获得无病毒苗木的有效途径，故茎尖培养是植物组织培养最常用的试材之一。 类型： 茎尖培养分为微茎尖培养和普通茎尖培养。微茎尖指带有1～2个叶原基的生长锥，其长度不超过0.5mm。普通茎尖指较大的茎尖（如几mm到几十mm）、芽尖及侧芽。这里主要讲普通茎尖培养。这种培养技术简单，操作方便，茎尖容易成活，成苗所需时间短。 一、普通茎尖培养 1. 取材　 挑选杂菌污染少，生长不久的茎尖。木本植物可在取材前对茎尖喷几次灭菌药剂。以保证材料不带或少带杂菌。用于普通茎尖培养，可先从植物的茎、藤或匍匐枝上切取2cm以上的顶梢。 一、普通茎尖培养 2. 灭菌 将采到的茎尖切成0.5～1.0cm长，并将大叶除去，休眠芽预先剥除鳞片。将茎尖置于流水冲洗2～4小时(视干净程度），再在70%的酒精中处理10-30秒，然后在稀释5 ～ 10倍的次氯酸钠（商品次氯酸钠为10%）中浸10～15分钟，最后用无菌水冲洗3 ～ 4次，或者用0.1 ～ 0.2%的氯化汞灭菌5 ～ 10分钟，无菌水冲洗5次以上。 一、普通茎尖培养 3.接种 为了减少污染，可在接种前再剥掉一些叶片，使茎尖为0.5cm左右大小。有些植物的茎尖由于多酚氧化酶的氧化作用而发生褐化，使培养基变褐，影响材料的成活。所以在接种时，不能用生锈的解剖刀，动作要敏捷，随切随接，减少伤口在空气中暴露的时间，也可配制1～5%Vc液，将切下的茎尖材料浸入处理一下。 一、普通茎尖培养 4. 培养 （1）培养基 多数茎尖培养采用MS作为基本培养基或改良MS培养基。 培养基中生长素是必须的，如2,4-D，IAA，NAA等，一般用0.1mg/L左右，高于此浓度，往往产生畸变芽或形成愈伤组织。 茎尖在培养过程中会出现生长太慢、生长太快和生长正常等三种类型。 一、普通茎尖培养 4. 培养 （2）初代培养 茎尖的初代培养主要是通过适宜的培养条件刺激顶芽和腋芽的生长。外植体启动生长的关键主要是培养基的激素配比与浓度，一般应使用较高浓度的细胞分裂素和较低浓度的生长素，解除顶端优势的抑制作用，生长素浓度过高容易产生愈伤组织。 一、普通茎尖培养 4. 培养 （3）继代培养　 茎尖长成的新梢，可切成若干小段，转入到增殖培养基中。长大