肝病与肝癌中EGFR、MMP2、MMP9表达及比较.pptVIP

肝病与肝癌中EGFR、MMP2、MMP9表达及比较 曹晓蕾 陈莉 ; 原发性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)是危害人类健康的常见肿瘤，尽管对其发生、发展、演化过程进行了大量的研究，但其发生机制尚未明了。对EGFR、MMP2、MMP9在肝癌发生发展中的作用尚未见报道。为此，本文采用免疫组化方法，检测比较在慢性肝病与肝癌中EGFR、MMP2、MMP9的表达，探讨其意义。 ;1.材料与方法 1.1材料：取南通医学院附属医院及周围市医院肝病蜡块标本47例，其中肝癌标本26例、慢性肝病(chronic hepatic disease,CHD)标本21例（包括肝炎、肝硬化）。连续切片4μm厚，贴于APES处理的载玻片上。EGFR、MMP2、MMP9及免疫组化试剂盒购于北京中山生物试剂公司。 ;1.2方法： ⑴HE染色切片病理观察，双盲法进行病理诊断。 ⑵免疫组织化学（SP法）检测EGFR、MMP2、MMP9在肝炎、肝硬化、肝癌组织中的表达。使用抗体为EGFR(Santa cruz Biotechnology Inc),工作浓度1：100;鼠抗人MMP9单克隆抗体（2M-0335）, 工作浓度1:50; 鼠抗人MMP2单克隆抗体(2M-0330), 工作浓度1:50。EGFR染色过程中使用胃蛋白酶消化，所有免疫组化切片经DAB染色，苏木素轻微复染。以磷酸盐缓冲液(PBS)代替第一抗体作为阴性对照。 ;1.3判断标准： EGFR阳性定位于肝实质细胞胞浆中，呈棕黄色；MMP2、MMP9阳性定位于胞浆中，呈棕黄色，可见于肝癌细胞、间质Ito细胞、再生肝细胞、新生胆管细胞中。 1.4统计学处理：用x2检验，P值取小于0.05作判断差异显著标准。 ;2.结果 2.1 EGFR、MMP2、MMP9在CHD、PHC中的表达特征 EGFR在CHD中仅有较弱表达，阳性率仅为28.57%(4/21) ；在PHC中呈异质性表达，阳性率为73.08%(19/26)，并且呈较强表达。MMP2在CHD中呈较强表达，阳性率为76.19%(16/21) ； MMP2在PHC中呈较强表达，阳性率为80.77%(21/26) 。MMP9在CHD中有较弱表达, 阳性率为52.38%(11/21) ， MMP9在PHC中呈较强表达，阳性率为80.77%(21/26) 。 ;2.2 EGFR 、MMP2、 MMP9在PHC和CHD中的比较（表1） 表1 EGFR、MMP2、MMP9在PHC和CHD中表达的比较 ;2.3PHC中EGFR、MMP2、MMP9三者表达的比较 2.3.1 26例PHC中MMP2、MMP9表达阳性病例完全一致，即当PHC病例MMP2阳性时，MMP9亦呈阳性，26例PHC中MMP2、MMP9阳性21例，占80.77%；阴性5例，占19.23%??? 2.3.2 PHC中MMP2、MMP9与EGFR表达的比较（表2） 表2 PHC中MMP2、MMP9与EGFR表达的比较 ;2.4CHD中EGFR、 MMP2、 MMP9三者表达的比较 2.4.1CHD中MMP2、MMP9表达的比较（表3） ;2.4.2CHD中EGFR与MMP2、MMP9表达的比较（表4） ;;;;;;;;;;;;;3.讨论 表皮生长因子受体（EGFR）是原癌基因C-erbB-1的表达产物，分子量为170 KD，属于穿膜受体烙氨酸激酶家族的成员，与细胞增殖、分化调节、肿瘤转化密切相关[1]。它在肿瘤形成中的作用日渐受到重视。许多肿瘤组织都有较高水平的EGFR的表达，并发现EGFR的表达与肿瘤的生物学行为有一定的相关性。本文发现，EGFR在CHD组织中阳性表达率较低（28.57%）,而在PHC中阳性表达率较高（73.08%）,经x2检验，EGFR在PHC、CHD中的表达有显著差异，EGFR的高表达与PHC有一定相关性。EGFR的高表达可能是其基因扩增和/或转录增加所致，因此，有人设想将EGFR作为治疗的靶抗原，将抗EGFR抗原的单克隆抗体与放疗或化疗剂连接制成“生物导弹”进行抗肿瘤治疗[2]，若这一设想能够实现，再加上本文所发现的EGFR在PHC中的高表达，就将为PHC的治疗提供一种新的思路。 ; 基质金属蛋白酶是一类分解细胞外基质组分的锌蛋白酶[3]。它们在有机体的生长发育中的细胞外基质逆转与重塑以及疾病中的病理损害起着极为重要的作用。MMP2是相对分子量为72000的明胶酶A，MMP9是相对分子量为92000的明胶酶B，明胶酶（Ⅳ型胶原酶）主要降解基底膜、Ⅳ型胶原和明胶。明胶是形成间质中胶原的主要成分。在体内由巨噬细胞、结缔组织细胞和肿瘤细胞合成与分泌。 ;