第1讲--细胞培养的设施与技术基础.pptVIP

临床检验诊断学教育部重点实验室;;;;细胞工程 (Cell engineering)***;细胞工程的研究内容**;细胞工程的范畴;细胞工程的范畴;绪论与课程介绍 P1-4;“细胞生物学”与“细胞工程”的区别？;主要以细胞为对象，以获得特定的细胞、组织产品 或新型物种的一门综合性生物技术。;前沿性：现代生物技术的热点 综合性：多学科交叉 应用性：工程类课程，重在产品与技术 争议性：新技术给伦理道德带来的冲击;发酵工程 酶工程 基因工程 细胞工程 组织工程 蛋白质工程 代谢工程;1997年多莉羊;第一章 细胞工程的设施与技术基础;第一节 细胞培养的设施和仪器设备;细胞培养的设施和仪器设备;;无菌操作室 培养室 制备室：通常是单独的，对无菌的要求不如上述严格，培养基等的制备 清洗室：器皿等清洗 消毒灭菌室 储藏室：液氮罐、冰箱、培养基、消毒后培养器皿;常用仪器与设备（P9）;工作原理 利用鼓风机驱动空气滤过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒而净化。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。 ;超净工作台：也称净化工作台 （形成气流屏障）。 常见类型（P9） 侧流式（垂直式，吸气型） 外流式（水平层流式，面向操作者流动，吹气型）;侧流式超净工作台;;无菌操作间：一般由更衣间、缓冲间和操作间三部分组成。 操作间放置：超净工作台及二氧化碳培养箱、离心机、倒置显微镜等。 缓冲间放置：电冰箱、冷藏器及消毒好的无菌物品等。;; CO2培养箱设定的条件为37℃ ，5％CO2 使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题： ①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微 松，以保证通气。 ②保持培养箱内空气干净。定期消毒 （90℃，14hrs)。 ③箱内火菌蒸馏水3000毫升蒸馏水槽中以 保持箱内湿度，避免培养液蒸发。;二氧化碳培养箱控制中心(包括键盘、显示器、指示器等) ;二氧化碳培养箱的结构 ;大容量细胞培养箱;倒置显微镜;自动双重纯水蒸馏器;过滤装置--过滤除菌;液氮容器;压力蒸汽消毒器;压力蒸汽消毒器;移液器;常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品。 ;1个10cm培养皿 = 2.5个6cm培养皿;生物安全的责任和义务 保证培养物不受污染，更要保证培养物不对人和环境造成 污染和危害; 据病原微生物的传染性、感染后对个体或人群的危害程度分为4类：; 据对病原微生物的生物安全防护水平，按国家《实验室生物安全认可准则》， 将实验室分为4级(细则略);第二节 细胞培养的条件;;1. 恒定的温度:37 ℃;2. pH：7.2-7.4;3. 气体;4. 营养—培养基;动物细胞培养基的发展过程;动物细胞培养基的基本要求;天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好 缺点：来源受限。成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析。易发生支原体污染。 ;1951年厄尔开发了供动物细胞体外生长的人工合成培养基(MEM) 合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的 目前已设计出许多种培养基，如DMEM、MEM、IMDM、 RPMI-1640、 M199、Ham12、McCoys 5A等;合成培养基优缺点： 优点：标准化生产，组分和含量相对固定，成本低 缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要;培养基的配制举例;无血清培养基的主要研制策略：在基础培养基中补充各种必需因子，如激素、生长因子 、结合蛋白 、贴壁和扩展因子等 无血清培养基由基础培养基和替代血清的补充成分组成 1975年，Sato首次成功地用无血清培养基培养了垂体细胞株，近20多年来已报道了几十种细胞系在无血清培养基中成功地生长和增殖;无血清培养基的组成及其主要补充成分 （1）激素和生长因子 （2）结合蛋白 （3）贴壁因子和扩展因子 （4）低分子量营养因子 ;可提高产品的表达水平、简化了提纯、鉴定 各种细胞产物的程序使细胞产品易于纯化;无血清培养基的缺点;无血清培养基的应用领域;向无血清培养液中添加能促进细胞系生长的补加物 都是独特的。 适用于某种细胞株的培养液，很可能不适合另一种 细胞株的生长。 即使同源组织的不同细胞株，所需补加物也不同;5. 血清;主要的血清类型;血清质量好坏是细胞培养成败的关键;血清的灭活(消除补体活性):56 ℃，30分钟;血清的保存、灭活;在一些基础研究中，往往影响实验结果 血清中含有某些不利于细胞生长的毒性物质或抑制物质，对某些细胞的体外培养有去分化作用 血清中大量成分复杂的蛋白质给疫苗、细胞因子、单克隆抗体等细胞产品的分离纯化带来很大困难;6. 抗