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薄层色谱分析步骤及注意事项 薄层色谱法 (thin layer chromatography  简写  TLC) 是  物理化学 的分离技术，常用于 药 物的分离与 分析  现对此 方法 的分析步骤及注意事项提点建议。 薄层色谱分析步骤 完成 TLC 分析通常需经制板、点样、展开、检出 4 步操作。 ⑴制板 在一平面支持物  (通常  玻璃 )上，均匀地涂制硅胶、氧化铝或其他  吸附剂薄层、样品的 分离、检测就在此薄层色谱板上进行。 一般选用适当规格的表面光滑平整的玻璃板。常用的薄层板规格有： 10cm× 20cm 、5cm ×20cm 、 20cm× 20cm 等。称取适量硅胶，加入 0.2 ％～ 0.5% 羧甲基纤维素 钠溶液 （CMC- Na ），充分搅拌均匀，进行制板。一般来说 10cm× 20cm 的玻璃板， 3 ～ 5g 硅胶 /块；硅胶 与羧甲基 纤维素 钠的比例一般为 1： 2 ～1 ： 4。制好的玻璃板放于水平台上，注意防尘。在 空气中自然干燥 后，置 1l0 ℃烘箱中烘 0.5 ～ lh，取出，放凉，并将其放于紫外光灯 (254nm) 下检视，薄层板应无花斑、水印，方可备用。 ⑵点样 用微量进样器进行点样。点样 ，先用铅笔在 层析 上距末端 lcm 处轻轻画一横线，然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样， 如果要重新点样， 一定要等前一次点样残余的 溶剂挥发后再点样， 以免点样斑点过 。一般斑点直径大于 2mm ，不宜超过 5mm. 底线距基线 1 ～2． 5cm ，点间距离为 lcm 左右，样点与玻璃边缘距离至少 lcm ，为防止 边缘效应 ，可将薄 层板两边刮去  1 ～ 2cm ，再进行点样。 ⑶展开 将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中，由于毛细管 作用 ，展开溶剂在薄层板 上缓慢前进，前进至一定距离后，取出薄层板，样品组分固移动速度不同而彼此分离。 ① 展开室应预饱和。为达到饱和效果，可在室中加入足够量的展开剂；或者在壁上贴两条与室一样高、 宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖。 ② 展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂，并且临用时新配为宜。 ③ 薄层板点样后，应待溶剂挥发完，再放人展开室中展开。 ④ 展开应密闭，展距一般为 8 ～15cm 。薄层板放入展开室时，展开剂不能没过样点。一般情况下，展开剂浸入薄层下端的高度不宜超过 0.5cm 。 ⑤ 展开剂每次展开后，都 需要 换，不能重复使用。 ⑥ 展开后的薄层板用适当的方法，使溶剂挥发完全，然后进行检视。 ⑦ Rf 值一般 控制 在 0.3 ～ 0.8 ，当 Rf 值很大或很小时，应适当改变流动相的比例。 ⑷ 斑点的检出 展开后的薄层板经过干燥后，常用紫外光灯照射或用显色剂显色检出斑点。对于无色组 分，在用显色剂时，显色剂喷洒要均匀，量要适度。紫外光灯的功率越大，暗室越暗，检出 效果就越好。 展开分离后， 化合物 在薄层板上的位置用比移值离与溶剂前沿至原点的距离的比值就是该化合物的  (Rf  值) 来表示。 化合物斑点中心至原点的距 Rf 值。 注意事项 铺板用的匀浆不宜过稠或过稀： 过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹； 过稀，水蒸发后，板表面较粗糙 匀浆配比 般是硅胶 G: 水=1 ： 2 ～ 3，硅胶 G:羧甲基纤维素 钠水溶液 =1:2 。 研磨匀浆的时间， 根据 经验来定，与空气湿度有关， 一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断 ，越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么明显。通常，板的质量对薄层鉴别的影响 不是很 ，影响最大的是展开剂的配制和展开 系统 的饱和。 点样 尽量用小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用 1 微升的点样管。 样，点的斑点 较小，展开的色谱图 分离 度好，颜色分明。 样品溶液的含水量越小越好， 样品溶液含水量大， 点样斑点扩散大。样品溶液的 溶剂 一般是无水 乙醇 、甲醇 、氯仿、 乙酸 乙酯。点好样的薄层 板用电吹风的热风吹干或放入 干燥 器里晾干。 展开剂配制 选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗， 强烈振摇使混合液充分混匀， 放置，如果 分层，取用体积大的一层作 展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸 来配制展开剂。 混合不均匀和没有分液的展开剂， 会造成 层析的完全失败。 各组成溶剂的比 例准确度对不同的 分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度，比如：取 1 ml 的溶剂，应使用 1ml 的单标移液管，移液管应符合计量认证要求，尽管 时候这不是 必须的。 展开系统的饱和 一般使用的是双槽的展开缸， 一槽用来放展开剂， 另一槽可加入氨水或硫酸。 把待展开