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薄层色谱分析步骤及注意事项 薄层色谱法 (thin layer chromatography 简写 TLC) 是 物理化学 的分离 技术，常用于 药 物 的分离与 分析 现对此 方法 的分析步骤及注意事项提点建议。 薄层色谱分析步骤 完成 TLC 分析通常需经制板、点样、展开、检出 4 步操作。 ⑴制板 在一平面支持物 (通常 玻璃 )上，均匀地涂制硅胶、氧化铝或其他 吸附 剂薄层、样品的 分离、检测就在此薄层色谱板上进行。 一般选用适当规格的表面光滑平整的玻璃板。常用的薄层板规格有： 10cm×20cm 、5cm ×20cm 、20cm×20cm 等。称取适量硅胶，加入 0.2 ％～ 0.5% 羧 甲基纤维素 钠 溶液 （CMC- Na ），充分搅拌均匀，进行制板。一般来说 10cm×20cm 的玻璃板， 3 ～5g 硅胶 /块；硅胶 与羧甲基 纤维素 钠的比例一般为 1：2 ～1 ：4 。制好的玻璃板放于水平台上，注意防尘。在 空气中自然干燥 后，置 1l0 ℃烘箱中烘 0.5 ～ lh ，取出，放凉，并将其放于紫外光灯 (254nm) 下检视，薄层板应无花斑、水印，方可备用。 ⑵点样 用微量进样器进行点样。点样 ，先用铅笔在 层析 上距末端 lcm 处轻轻画一横线，然后 用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样， 如果要重新点样， 一定要等前一次点样残余的 溶剂挥 发后再点样， 以免点样斑点过 。一般斑点直径大于 2mm ，不宜超过 5mm. 底线距基线 1～ 2 ．5cm ，点间距离为 lcm 左右，样点与玻璃边缘距离至少 lcm ，为防止 边缘效应 ，可将薄 层板两边刮去 1～2cm ，再进行点样。 ⑶展开 将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中，由于毛细管 作用 ，展开溶剂在薄层板 上缓慢前进，前进至一定距离后，取出薄层板，样品组分固移动速度不同而彼此分离。 ① 展开室应预饱和。为达到饱和效果，可在室中加入足够量的展开剂；或者在壁上贴两条 与室一样高、 宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖。 ② 展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂，并且临用时新配为宜。 ③ 薄层板点样后，应待溶剂挥发完，再放人展开室中展开。 ④ 展开应密闭，展距一般为 8 ～15cm 。薄层板放入展开室时，展开剂不能没过样点。一般 情况下，展开剂浸入薄层下端的高度不宜超过 0.5cm 。 ⑤ 展开剂每次展开后，都 需要 换，不能重复使用。 ⑥ 展开后的薄层板用适当的方法，使溶剂挥发完全，然后进行检视。 ⑦ Rf 值一般 控制 在 0.3 ～0.8 ，当 Rf 值很大或很小时，应适当改变流动相的比例。 ⑷ 斑点的检出 展开后的薄层板经过干燥后，常用紫外光灯照射或用显色剂显色检出斑点。对于无色组 分，在用显色剂时，显色剂喷洒要均匀，量要适度。紫外光灯的功率越大，暗室越暗，检出 效果就越好。 展开分离后， 化合物 在薄层板上的位置用比移值 (Rf 值) 来表示。 化合物斑点中心至原点的距 离与溶剂前沿至原点的距离的比值就是该化合物的 Rf 值。 注意事项 铺板用的匀浆不宜过稠或过稀： 过稠， 板容易出现拖动或停顿造成的层纹； 过稀， 水 蒸发 后， 板表面较粗糙 匀浆配比 般是硅胶 G: 水=1 ：2 ～3，硅胶 G:羧 甲基纤维素 钠水 溶液 =1:2 。 研磨匀浆的时间， 根据 经验 来定， 与空气湿度有关， 一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来 判断 ，越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上 样量。涂