液相色谱柱的日常维护讲义.pptVIP

1 第二部分 HPLC 柱 常见问题及日常维护 2 I. 常见问题 基线噪音 可能的原因： 流动池脏 检 测 器 灯 有 问 题 如果是周期性的，则起源于泵的脉冲 温度对检测器的影响 气 泡 经 过 检 测 器 Time (min.) 3 基线漂移 ? 梯度洗脱 ? 温度不稳定 ( 示差检测器） ? 流动相中有污染物 ? 柱中的流动相没有平衡 ? 体系中有污染物流出 可能的原因： 4 鬼 峰 鬼峰 —— 即使不样也会出现的峰 20% - 100% MeOH 没有进样 60 15 30 15 0 3 7 15 17 问题 1- 流动相脏 问题 2- 样品过量 ( 也可能是回收率太差 ) 5 峰 型 双 峰 柱 塌 陷 正 常 峰 双 峰 柱中有死体积 过滤片部分堵塞 只有一个双峰 —— 组分的共洗脱 可能原因： 样品与溶剂不匹配 6 峰 型 所有的峰都展宽 柱效降低 —— 柱死体积 大进样量 / 质量 高捻度流动相 部分峰展宽 前次进样后流出的组分 大分子量样品 —— 蛋白或聚合物 峰展宽 样品与流动相不匹配 7 峰 型 拖尾峰 对称性 1.2 Normal Tailing Normal Tailing 原因： 部分峰拖尾 二次保留效应 —— 残留硅醇基的反应 小峰紧跟在大峰的后面流出 柱头有污染 金属 所有峰拖尾 额外的柱效应 柱损坏 不适当的样品量 / 溶剂 8 峰 型 正常峰 伸舌峰 前伸峰 不对称性 0.9 可能的原因 柱过载 在大峰前，有小峰流出 样品溶剂不适当 柱死体积 过滤片部分堵塞 9 峰 型 原因 ? 样品的吸收比流动相的吸收值低 ? 当样品组分通过色谱柱时打破了原来的平衡 ? 用示差检测器时是正常的 10 宽 峰 柱外体积增加 * 在进样口到柱或柱到检测器之间，使用细的短的连接管 * 保证所有的管路接头都使用正确 * 用小体积检测池 * 减少进样量 11 柱外体积效应的影响 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 11 柱外体积 10 μ L 20 μ L Time, min. 2.1 x 150 mm F = 0.2 mL / min. (1ul 进样 ) 12 I. 不进样时柱压连续升高 - 泵密封垫 - 流动相有颗粒 - 流动相溶解性 - 流动相的不稳定性 ( 聚合 ) - 形成柱死体积 ( 与使用条件有关 ) II. 进样时压力升高 - 样品有颗粒 - 样品在流动相中不溶 - 样品组分与固定相不兼容 压力 13 I. 所有峰都向低保留值方向漂移（酸、碱、中性化合物） - 键合相流失 - 流动相不稳定 ( 可能性较小 ) - 溶剂输送系统 ( 流速变化 ) II. 所有峰都向高保留值方向漂移 - 在水 / 有机溶剂的混合体系中，有机溶剂含量减少 - 柱改变 ( 可能性较小 ) - 溶剂输送系统 ( 流速变化 ) III. 离子型化合物的色谱峰的保留值漂移 - 流动相中挥发性组分损失 ( 离子强度 , pH 漂移 ) - 柱改变 ( 键合相或污染 ) 保留值漂移 14 I. 与流动相有关的问题 - 使用新鲜的流动相 ?pH ? 电导 ? 色谱性能测试 II. 与色谱柱有关的问题 - 测试新柱 - 用标准的测试混合样测试新柱 - “ 清洗” 色谱柱后再测 - 考虑样品基质与使用条件对柱稳定性的影响 保留值漂移