组织培养实验(植物部分).pdfVIP

组织细胞培养技术实验教案 实验一植物组织培养的培养基的配制、灭菌与仪器操作培训 实验二 植物的离体培养 实验三 植物离体培养中的形态观察和愈伤组织继代培养 实验四 动物细胞培养的培养基配制灭菌与仪器操作培训 实验五 鸡胚原代细胞的培养 实验六 动物细胞的传代培养 实验七 动物细胞的冻存与复苏 实验一 植物组织培养的培养基的配 制、灭菌与仪器操作培训 【目的要求】 学习并掌握植物组织常用培养基的组成、配制与灭菌方法。培养基能够提供植物生 长、繁殖所必须的各类营养物质，以及生长因子，是开展植物组织培养研究的基础和前 提。植物的种类不同，研究的目的不同，所需要的培养基的种类也各不相同。 【实验用品】 1. 实验用具：电子天平、烧杯、量筒、三角瓶或培养瓶、移液管、药匙、玻棒、 pH 试 纸、吸耳球、牛皮纸、皮筋等。 2. 药品：蔗糖、琼脂、 0.1mol/L NaOH 、 0.1mol/L HCL 、各种培养基母液、激素母液 【内容与方法】 1. 分组配制培养基激素 1 / 12 用分析天平称取生长素或细胞分裂素 50-100mg 。生长素用少量 95% 的酒精或 0.1mol/L 的 NaOH 溶解，细胞分裂素用 0.1mol/LHCL 加热溶解。加蒸馏水定容至 100ml 配制成 0.5- 1mg/L 的溶液。 ∨激素﹦∨配制 ×培养基中所要求的激素浓度 ÷激素母液浓度 2. 湿热灭菌培养基 称取规定数量的琼脂，加水到培养基最终容积的 3/4，水浴或电炉使之加热溶解。根据 配方要求，把按顺序量取的各种母液以及称取的蔗糖，都加入煮好的琼脂中，然后加水定 容。 用 0.1mol/L 的 NaOH 或者 HCl 调 pH 。分装培养基，包好或盖好，标明编号。 121℃(103kPa)灭菌 15-20min 。 3. 作好植物组织培养的各项准备工作 制备无菌水： 121℃(103kPa) 灭菌 40min ；配制 0.1%HgCl 2 溶液（放置棕色瓶中）；准 备接种用培养皿、金属器械等用具。 注意： 1. 实验前 1 天，无菌培养室每天都要用 0.2% 的新洁尔灭拖洗地面 — 次，超净工作台台面 每次实验前要用 75 ％酒精擦洗。然后紫外线消毒。 2. 实验中所用的各种容器一定要洗净、烘干。 3. 用电子天平称量药品时，一定要用称量纸，对于有腐蚀性的药品，应将其放置在小烧 杯中称量。 4. 各种母液应保存在 2-4 ℃的冰箱中，以免变质、长霉。 5. 使用高压灭菌锅时，一定要正确操作，并提前检查其中的水是否合适。 6. HgCl 2 属于一种腐蚀性极强的剧毒物品，配制时要注意安全。 实验二 植物的离体培养（两次课程） 【目的要求】 1：尝试进行植物的组织培养 2 / 12 2：了解植物组织培养的基本原理 【实验用品】 材料：百合鳞茎、菊花，灭菌培养基，体积分数为 70% 的酒精，体积分数为 20%的次氯酸钠溶液，无 菌水。 用具：锥形瓶或大试管，烧杯，酒精灯，恒温箱，接种箱，滤纸，消毒用酒精棉球，培养皿，解剖 刀，镊子、打孔器。 【内容与方法】 1. 外植体消毒：在接种箱上将胡萝卜段用酒精消毒并用无菌水清洗，再用次氯酸钠处 理，立即用无菌水消毒。用无菌滤纸吸去外植体表面的水分，用无菌解剖刀锲成横切 片，再选取有生命力旺盛的部位，切成小块。 2. 接种：将组织块接种到培养基上，用锡箔纸封盖瓶口，并用橡皮筋扎紧。 3. 培养：将