遗传实验2-2粗糙链孢霉生活史及.pptVIP

实验二 粗糙链孢霉生活史及杂交 ［一、实验原理］ 粗糙链孢霉属于真菌中的子囊菌纲。粗糙 链孢霉的菌丝体是 单倍体 （ n=7 ），每一菌丝 细胞中含有 几十个细胞核 。由菌丝顶端断裂形 成分生孢子。 分生孢子有两种，小型分生孢子中含有一 个核，大型分生孢子中含有几个核。分生孢子 萌发成菌丝，可再生成分生孢子，周而复始， 这是粗糙链孢霉的 无性生殖 过程。 链孢霉（ Neurospora crassa ）的生活史 图 8-19 粗糙链孢霉的菌株有两种不同的接合型， 用 A,a 或 mt+, mt- 表示，他们受一对等位 基因控制。不同结合型菌株的细胞接合产 生有性孢子，这过程称为 有性生殖 。有性 生殖可以通过两种方式进行。 一是产生 原子囊果 ，内附有产囊体，若 另一接合型的 分生孢子 落在这 原子囊果的 受精丝 上时，分生孢子的细胞核进入受精 丝，到达产囊体，形成接合型基因的异核 体。 二是不同接合型的菌株的 菌丝连接 ， 两种接合型的细胞核发生融合形成合子， 产生 子囊果。 粗糙链孢霉的子囊和子囊型 其中， 1 和 2 是 未交换的，称第一 次分裂分离子囊； 3-6 都是发生交换 的，称第二次分裂 分离子囊。 因此，统计第二 次分裂分离子囊占 总子囊数的比例， 乘以 0.5 ，就可决定 某一基因与着丝粒 之间的重组值。重 组值去掉 % （即乘以 100 ），即为该基因 图距。 粗糙链孢霉的子囊和子囊型 本实验用 赖氨酸缺陷型 （记作 Lys - ）与 野生型 （记作 Lys + ）杂交，得到的子囊孢子分离为 4 个黑的（＋）， 4 个是灰的（ - ）。黑的孢子是野生型；赖氨酸缺陷型孢 子成熟迟，所以呈灰色。根据黑色孢子和灰色孢子在子 囊中的排列顺序，可有 6 种子囊类型。 子囊型（ 1 ）和（ 2 ）的产生如图。第一次减数分裂 （ M 1 ）时，带有 Lys + 的两条染色单体移向一极，而带有 Lys - 的两条染色单体移向另一极。 Lys + /Lys - 这对基因在 第一次减数分裂时分离，称第一次分裂分离。第二次减 数分裂（ M 2 ）时，每一染色单体相互分开，形成四分体， 顺序是＋＋——或——＋＋，再经过一次有丝分裂，成 为（ 1 ）和（ 2 ）子囊型。形成这两种子囊型时，在着丝 粒和基因对 Lys + /Lys - 间未发生过交换，是第一次分裂分 离子囊。 图中（ 3 ）和（ 4 ）的形成。由于 Lys 基因与着丝粒 间发生了一个交换， Lys + /Lys - 在第一次减数分离时 没有分离，到第二次减数分裂（ M 2 ）时，带有 Lys+ 的染色单体才和带有 Lys- 的染色单体相互分开，所 以称为第二次分裂分离。然后再经一次有丝分裂， 形成 4 个孢子对，顺序是＋＋ -- ＋＋ -- 或 -- ＋＋ -- ＋＋。这是第二次分裂分离子囊。 （ 5 ）和（ 6 ）子囊型的形成与（ 3 ）和（ 4 ）类似， 也是两个染色单体发生了交换，不过交换不是发生 在第 2 条染色单体与第 3 条染色单体之间，而是发生 在 1 ， 3 或 2 ， 4 两条染色单体之间。 粗糙链孢霉 lys + 与 lys - 杂 交子囊孢子的排列顺序 (1) 、 (2) 为非交换型 (3) 、（ 4) 、 (5) 、 (6) 为交换型子囊 (7) 、（ 8) 、 (9) 、 (10) 是由转换造成的异常比例 ［二、实验目的］ 1 ． 掌握粗糙链孢霉的杂交技术； 2 ． 统计杂交结果，计算基因图距。 [ 三、实验材料 ] 粗糙链孢霉野生型菌株， Lys+, 接合型 A. 粗糙链孢霉赖氨酸缺陷型菌株 Lys-, 接合型 a. [ 四、实验器具和药品 ] 1. 器具：显微镜，钟表镊，解剖针，接种 针，载玻片，试管，培养皿。 2. 药品： ５％次氯酸钠。 [ 五、实验步骤 ] 1 、菌种活化： 把野生型和缺陷型菌种从冰箱取出， 分别接在两支土豆培养基试管斜面上， 28 O C 温箱培养５天。培养到菌丝上部有分生孢子 产生。 ２、杂交： （１）同时在杂交培养基上接种两亲本菌株的分生 孢子或菌丝， 25 O C 温箱进行混合培养。注意要贴 好标签，写明亲本菌株及杂交日期。 （ 2 ）杂交后５－７天就能看到许多棕色的原子囊果 出现，以后原子囊果变黑变成子囊果。 （ 3 ）在７－１４天左右，就可在显微镜下观察。 另外一种方法： 在杂交培养基上接种一个亲 本菌株， 25 O C 培养５－７天后即有原子囊果出 现。同时准备好另一亲本菌株的分生孢子，悬 浊于无菌水中（近于白色的悬浊液），将此悬 浊液加到形成原子囊果的培养物表面，使表面 基本湿润，继续 25 O C 培养。原子囊果在加进分 生孢子一天后即可开始增大变黑成子囊果，７ 天后即成熟。 ３、显微镜