细菌的形态学检查课件.pptVIP

微生物基本检验技术 华中科技大学同济医院检验科 致病菌的检验程序 直接涂片镜检 ↑ 涂片镜检 标本→分离培养→可疑菌落→ 生化反应 ↑ 血清学鉴定 分子生物学技术 药敏试验 动物试验 细菌形态学检查 ? 1 、不染色标本检查 ? 2 、染色标本检查 显微镜 ? 普通光学显微镜 ? 暗视野显微镜 ? 相差显微镜 ? 荧光显微镜 ? 电子显微镜 普 通 光 学 显 微 镜 最为常用的一种显微镜，普通显微镜用 油镜可放大 1000 倍，可将 0.25 μ m 的微粒 放大到肉眼可见的 0.25mm, 一般细菌大于 0.25 μ m ，故用普通光学显微镜可见。 暗 视 野 显 微 镜 ? 多用于检查不染色的活细菌 和螺旋体的形态及运动观察。 扫 描 电 子 显 微 镜 ? 放大倍数可达数万至数十万倍，能分辨 1nm 的物体，可观察细菌表面和内部超微 结构。 不染色标本检查 ? 应用：主要用于检查生活状态下细菌的 动力及运动状况 ? 常用方法：压滴法、悬滴法、暗视野显 微镜检查 不染色标本检查 - 压滴法 载玻片 细菌悬液 盖玻片 不染色标本检查 - 动力观察 ? 动力 + ：可看到细菌自一处移至另一处， 有明显的方向性位移 ? 动力 - ：受水分子撞击细菌呈现布朗运动， 只在原地颤动而无位置的改变。 染色标本的检查 - 常用染料 ? 碱性染料 电离后显色离子带正电荷，易与带负电荷的被染 物结合。细菌的等电点在 pI2~5 之间，易与带正电荷的染料结合 而着色。常用的染料有碱性复红、结晶紫、亚甲蓝等。 ? 酸性染料 : 电离后显色离子带正电荷，易与带负电荷的被染 物结合。 通常用来染细胞质，而很少用于细菌的染色。常用的染 料有伊红、刚果红等。 ? 复合染料（中性染料）及荧光染料 复合染 料是碱性染料和酸性染料的复合物，如瑞氏染料（伊红亚甲蓝）、 姬姆萨染料（伊红天青）等；荧光染料如荧光标记的抗体，荧光 素常用异硫氢基荧光素。用于某些特殊的染色技术。 ? 脂溶性染料 如 Sudan black 。 染色标本的检查 染色方法的种类 ? 单染法 : 采用一种染料染色 ? 复染法（ 鉴别染色 ） : 采用两种或两种以 上的不同染料进行先后染色，使不同种 类的细菌、同种细菌的不同结构，分别 染上不同的颜色，以便鉴别细菌。 步骤： 结果 : 阳性菌 —— 紫色 阴性菌 —— 红色 结晶紫初染 碘液媒染 乙醇脱色 复红复染 涂片固定 由丹麦医生 Hans Christian Gram 于 1884 年创立 。 革兰染色法（ Gram Stain ） Figure 1 - A Gram stain of Gram + Staphylococcus cells. Figure 2 - Gram stain of Gram - E. coli cells Figure 步骤： 涂片固定 酸性复红初染 3% 盐酸酒精脱色 美蓝复染 镜检 抗酸染色法 结果 : 抗酸菌 ——— 红色 ； 非抗酸菌 —— 蓝色 。