第十章细胞增殖及其调控_图文.docVIP

第十一章细胞增殖及其调控 一、细胞周期概述 二、细胞分裂 三、细胞周期调控 细胞增殖是生命的基本特征?单细胞受精卵发育成初生婴儿,细胞增至1012个;成人1014个细胞,约200种类型。 ?成人体内每秒钟有数百万新细胞产生,以补偿衰老和死亡的细胞。※细胞增殖是生命的基本特征,种族的繁衍、个体的发 育、机体的修复等都离不开细胞增殖。 ※细胞增殖是通过细胞周期(cell cycle 来实现的,而细胞周期的精确而有序运行(G1→S →G2→M →G1周期运转受严格的调控机制所监控(复杂的调控蛋白网络,即细胞周期调控系统。 ·细胞无限制增长对个体来说意味着癌症,个体无限制繁殖对地球来说意味着灾难。 一、细胞周期概述 (一基本概念----什么是细胞周期? (二细胞周期中的主要事件 (三细胞周期同步化 (一什么是细胞周期 细胞周期指一次细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的时期(也称细胞生活周期或细胞繁殖周期,可分为四个 阶段: --G1期(gap1:分裂完成到DNA复制之前的间隙期。 --S期(synthesis phase:DNA复制阶段。只有在这一时期3H-TdR才能掺入新合成的DNA中。 --G2期(gap2:DNA复制完成到分裂之前一段时期。 --M期:又称D期,分裂开始到结束。 --G0期:细胞暂时离开细胞周期、停止分裂、去执行一定的功能的时期。 G0期多发生在G1期。G0期一旦得到信号,会迅速返回细胞周期(如结缔组织中的成纤维细胞等。 A typical mammalian cell has a cell cycle time of 24 hours, with 12 hr G 1, 6-8 hr S, 3-4 hr G 2, and 1 hr M 细胞周期分为四个阶段 ?从增殖的角度,可将高等动物的细胞分为三类: ①周期中细胞(连续分裂细胞:在细胞周期中连续运转,如 上皮组织基底层细胞、造血干细胞。 期细胞:暂不分裂,但适当刺激下可重②静止期细胞(G 新进入细胞周期,如淋巴细胞、肝、肾细胞等。 ③不分裂细胞(终末分化细胞: 指不可逆地脱离细胞周期, 不再分裂,又称终端细胞, 如神经细胞、成人心肌细胞、 横纹肌细胞、多形核白细胞等。 (二细胞周期各时相的主要事件 G1期: (1合成蛋白(酶、糖类、脂类等,但不合成DNA,是细胞的最初生长期。 (2G1期晚期的起始点(限制点或检验点是G1期的基本事件,受内外多种因素的监制以决定G1期向S期的转换。S期: DNA的复制,含量加倍;组蛋白的含量也相应增加。 DNA立即与组蛋白结合,形成核小体。 G2期: (1合成RNA和某些特定的蛋白质(如组成纺锤丝的微管蛋白、染色体凝集因子等;能量的准备。 (2能否进入M期,受G2期检验点的控制。 M期:细胞分裂。 (三细胞周期同步化(synchronization 指在自然过程中发生或经人为处理造成的细胞群体处于细 胞周期同一时相,前者称自然同步化,后者称为人工同步化。 在一般培养条件下,群体中的细胞处于不同的细胞周期时相之中。 为了研究某一时相细胞的代谢、增殖、基因表达或凋亡,常需采取 一些方法使细胞处于细胞周期的同一时相。 1、自然同步化 例: 1多核体:如粘菌只进行核分裂,而不发生胞质分裂,形成多核体。数量众多的核处于同一细胞质中,进行同步化分裂,使细胞核达108。2水生动物的受精卵:如海胆卵可以同时授精,最初的3次细胞分裂是同步的。 3增殖抑制解除后的同步分裂:如真菌的休眠孢子移入适宜环境后,它们一起发芽,同步分裂。 2、人工同步化 (1选择同步化 分离出处于不同时相的细胞,获得处于不同时相的细胞群体。 1有丝分裂选择法 如M期同步化的方法之一-------振荡收集法 处于分裂期(M期细胞变圆隆起,与培养皿的附着性低,此时轻轻 振荡,收集培养液,离心即可获得一定数量M期细胞。 –优点:操作简单,同步化程度高,细胞没受药物伤害。 –缺点:获得的细胞数量较少(分裂细胞约占1%~2%。 2密度梯度离心法 基于某些细胞处于不同周期时相时,其体积和质量有显著差异, 可用密度梯度离心法进行分离。 (2诱导同步化 通过药物诱导使细胞周期同步化在某个特定时相。 ?1DNA合成阻断法:(S期同步化方法 ?选用DNA合成的抑制剂,可逆地抑制DNA合成。常用TdR(胸腺嘧啶核苷双阻断法。 ?TdR是DNA合成抑制剂,可逆地抑制S期细胞DNA合成而不影响其它细胞周期运转,最终可将细胞群体阻断在G1/S期交界处。 –优点:同步化程度高,适合所有体外培养细胞系,被广泛采用; –缺点:产生非均衡生长,个别细胞体积增大。 ?2中期阻断法 ?用微管抑制剂秋水仙素或秋水仙酰胺(毒性较小将细胞阻断在中期。?--优点是便于观察染色体 ?--缺点是可逆性较差。 TdR