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1、样品前处理目的、样品前处理方法都有哪些？常用 C18 固相 萃取法原理、洗脱步骤、注意事项。 1．样品前处理目的： 1）浓缩痕量的被测组分，提高方法的灵敏 度，降低检测限； 2）去除样本中的基体与其他干扰物质 ； 3）通过衍 生化，使被测物转化成为检测灵敏度更高的物质或转化为与样本中 干扰组分能够分离的物质，提高方法的灵敏度和选择性； 4）保护下 游分析仪器以及测试系统、避免影响整机性能及寿命。 2．样品前处理方法：沉淀，液—液萃取，固相提取，渗析/超滤 ，电 泳，蒸馏/蒸发 3．常用 C18 固相萃取法原理：固相提取：利用固相吸附剂将液 体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然 后再用洗脱液洗脱，达到分离和和富集的目的。利用杂质或目标化 合物与样品基体溶剂和吸附剂之间 和力的相对大小差异实现净 化分离。 4．洗脱步骤 ： 1）活化:依次用强溶剂、弱溶剂 缓冲溶液）进行活化； 2）上样 ：用能够溶解样品的弱溶剂携带样品上柱，既要保证样 品分析物的有效溶解，又要确保溶剂强度不至于把被分析化合物从 柱上洗脱下来； 3）淋洗：用具有一定强度的混合溶剂淋洗去除干扰杂质，确保 杂质被洗脱，而被分析化合物有效的保留在柱上； 4）洗脱：用较强的溶剂把被分析化合物从柱上替换洗脱下来。 5．注意事项： 1）根据分析目标物的理化性质选择合适的 SPE 柱； 2）一般 SPE 柱要防止干涸； 3）注意控制柱载量，防止穿透过载； 4）严格控制上样液和洗脱液滴速； 5）防止混浊样品堵塞柱子； 2、以高效液相色谱法测定某类药物含量为例，试述分析方法验 证的内容。 查阅文献） 系统适应性： 1．准确度：指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度， 用百分回收率表示 2．精密度：是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样 测定所得结果之间的接近程度。用偏差 d）、标准偏差(SD)、相对标 准偏差(RSD) 变异系数，CV）表示。 A 重复性 :在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精 密度； B 中间精密度：同一实验室，不同时间由不同分析人员用不 同设备所得结果的精密度。 C 重现性：不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。 3．专属性：指有其他成分 杂质、降解物、辅料等）可能 存在情况下采用的方法能准确测 定出被测物的特性，能反映该方法在有共存物时对供试物准 确而专属的测定能力。是指 该法用于复杂样品分析时相互干扰程度的度量。 4．检测限：试样中被测物能被检测出的最低量。常用%、ppm 、ppb 表示。 5．定量限：是一种含量测定的定量参数，指样品中被测 物能被定量测定的最低量，结果应 具有一定准确度和精密度。常用%、ppm 、ppb 表示。 6．标准曲线：在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直 接呈正比关系的程度 7．线性范围：指达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测 试方法适用的高低限浓度或量的区间。 8．耐用性：指测定条件稍有变动时，结果不受影响的承受程度， 为常规检验提供依据。是衡量实验室和工作人员之间在正常情况 下实验结果重现性的尺度。 3、简述高效色谱原理，从速率理论方程出发试述影响分离的因 素 1.高效色谱原理: 当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与 固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异， 与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混 合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的 时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。与适当的柱后检测方法 结合，实现混合物中各组分的分离与检测。 2 从速率理论方程出发试述影响分离的因素: 速率方程（也称范-弟姆特方程式） H = A + B/u + C·u