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实用帖｜血液样本的采集与保存 在脊椎动物中，外周血一直被认为是侵害性较小、富有价值的检 测样本。在许多生物样本库中，由于血液样本的常规收集、处理及保 存方法简便、成本低且富含可利用成分和生物分子，因此是进行多种 项目分析的理想实验材料。然鹅，科研僧们历经千辛万苦最后发现获 得的血液样本 RNA 降解了。。。。额，这就很惆怅了。 所以呢，在样本采集、处理及储存过程中必须格外注意，从根本上确保获得高质量的RNA。 今天小编和大家一起来聊一聊在进行 RNA 实验时血液样本如何进行收集与保存。 血液的组成 首先来熟悉一下血液的组成。 人类的血液由血浆和血细胞组成。其中血浆约占血液的 55%，是水，糖，脂肪，蛋白质， 钾盐和钙盐等的混合物。血细胞约占血液的 45%，主要分为红细胞、白细胞和血小板。而哺 乳动物成熟的红细胞和血小板是无核的。 血浆和血清 血浆是离开血管的全血经抗凝处理后，通过离心沉淀，所获得的不含细胞成分的液体， 2+ 2+ 其中含有纤维蛋白原，不含游离的 Ca ，若向血浆中加入Ca ，血浆会发生再凝固。 血清是离体的血液凝固之后，经血凝块聚缩释出的液体，其中已无纤维蛋白原，但含有 2+ 游离的 Ca ，血清中少了很多的凝血因子但多了很多的凝血产物。 采血管的选择 采血管，大家都不陌生，去医院抽个血，一定会用到采血管，那么问题来鸟，这么多颜 色的采血管，有什么区别呢？下面小编来给大家介绍一下采血管的分类及不同颜色试管帽代 表的含义。 1.蓝色头盖管 （含有柠檬酸钠抗凝剂的采血管） 2.黑色头盖管(含有 0.109mol/L 柠檬酸钠) 3.紫色头盖管(含有乙二胺四乙酸以及其盐的采血管) 4.绿色头盖管 （肝素抗凝管） 5.灰色头盖管(含有草酸钾/氟化钠） 6.橘红色头盖管 （促凝管） 7.金黄色头盖管 （含有惰性分离胶及促凝剂的采血管） 8.红色头盖管 （无添加剂的干燥真空管） 抗凝剂有很多种，原理包括螯合钙、抑制蛋白酶和抑制血小板活化等。虽然有这么多抗 凝剂可供选择，但不建议使用肝素抗凝剂，因为肝素会同引物和酶竞争性结合核酸，影响后 续的实验结果。所以对于血清样本，采血管推荐使用黄盖采血管（促凝管或促凝管带分离胶）。 血浆样本，采血管推荐使用紫盖采血管（EDTA-K2 或 EDTA-K3）。 血液总 RNA 的提取 目前对血液总RNA 的提取，前期处理主要分为红细胞裂解法及淋巴细胞分离法。两种方 法各有优缺点。 由于红细胞裂解法操作简单，能获得几乎所有白细胞的RNA，因此这种方法被广泛使用。 对于血液 RNA 的抽提,除了采用传统 Trizol 进行抽提之外，市面上也涌现出各式各样的试剂 盒，如何在众多的试剂盒中挑选出最适合自己的一款，也需要考验眼力哦！ 今天小编给大家推荐一款比较好用的血液 RNA 提取试剂TRIzol® LS Reagent，比 TRIzol 还要好用哦！！！（并不是托，亲测，好用。。。。） 如何进行取样？ 全血样本取样方法 全血样本 为尽可能缩短取样时间，保证 RNA 质量，建议使用抗凝采血管（不建议使用肝素抗凝管） 采集全血。采血后轻轻倒转采血管混合 4~5 次，使抗凝剂与血液混匀。将采集好的全血快速 转移至单独的冻存管或离心管，按照每 250ul/管分装，加 750ul(即三倍体积)的Trizol LS， 混匀。液氮速冻后，放-80 °C 冰箱保存。长期保存，可放入液氮。每个环节尽可能的快速 完成，避免 RNA 的降解。 每个环节尽可能的快速完成，避免 RNA 的降解。 还需要小伙伴们注意的是，保存全血所使用的冻存管或离心管，操作中使用的枪头盒离 心管等均需要 RNase-free 哒，装好样品后管口需要以封口膜封好，防止污染，分装好的样 本做好标记，避免混淆。 血清样本取样方法 血清样本 采用快速分离法 建议使用橘黄色促凝采血管（可在 5min 内使采集的血液凝固，适用于急诊血清系列生 化试验）采集全血，采血后轻轻倒转采血管混合 4~5 次，使促凝剂与血液混匀。直立置于 4 ℃待血液完全凝固，1000g 离心 10 分钟，分离血清。将采集的血清转移至单独的冻存管或 离心管，按照每 250 μl/管分装。液氮速冻后，放-80℃冰箱保存。长期保存，可放入液氮。