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过柱子的经验总结 单一溶剂的极性大小顺序为 ： 石油醚（小）→环己烷→四氯化碳→三氯乙烯→苯→ 甲苯→二氯甲烷→氯仿→ 乙 醚→ 乙酸乙酯→ 乙酸甲酯→丙酮→正丙醇→ 甲醇→ 啶→ 乙酸（大） 混合溶剂的极性顺序： 苯∶氯仿（1+1）→ 环己烷∶乙酸乙酯（8+2）→氯仿∶丙酮（95+5）→苯∶丙酮（9+1）→ 苯∶乙酸乙酯（8+2）→氯仿∶乙醚（9+1）→苯∶甲醇（95+5） →苯∶乙醚（6+4）→环己烷∶ 乙酸乙酯（1+1）→氯仿∶乙醚（8+2）→氯仿∶甲醇（99+1）→苯∶甲醇（9+1）→氯仿∶丙 酮（85+15）→苯∶乙醚（4+6）→苯∶乙酸乙酯（1+1）→氯仿∶甲醇（95+5）→氯仿∶丙酮 （7+3）→苯∶乙酸乙酯（3+7）→苯∶乙醚（1+9）→ 乙醚∶甲醇（99+1）→ 乙酸乙酯∶甲醇 （99+1）→苯∶丙酮（1+1）→氯仿∶甲醇（9+1） 过柱子经验总结 1, 选柱子:现在见到的柱子径高比一般在 1:5-10. 2, 称量:100-300 目硅胶,称 30-70 倍于上样量;如果极难分,也可以用 100 倍量的硅胶书中写硅胶量是样品量的 30-40 倍,具体的选择要具体分析.如果所 需组分和杂质分的比较开(是指在所需组分 Rf 在 0.2--0.4,杂质相差 0.1 以上) , 就可以少用硅胶. 3, 选洗脱剂:一般淋洗剂是采用 TLC 分析得到的展开剂的比例再稀释一倍 后 的溶剂.极性小的用乙酸乙酯:石油醚系 ;极性较大的用甲醇:氯仿系 ;极 性 大的用甲醇:水:正丁醇:醋酸系 .要使所需点在 Rf 值在 0.2-0.3 左右的比 较好. 常用溶剂的极性顺序:石油醚环己烷/ 己烷苯乙醚氯仿 乙酸乙酯 正丁醇丙 酮 乙醇 甲醇水. 一般把两种溶剂混合时, 采用高极性/低极性的体积比为 1/3 的混合溶剂. 拖尾可 以加入少量氨水或冰醋酸. 乙酸乙酯/石油醚= 4:1 可用 TLC 分开.乙酸乙酯和石 油醚(60-90). 4, 搅成匀浆:先把硅胶泡在烧杯中,用干硅胶体积一倍的溶剂泡,用超声波超 半个小时,中间看到气泡时用玻璃棒搅一下.如果洗脱剂是石油醚/ 乙酸乙酯/丙 酮体系,就用石油醚拌;如果洗脱剂是氯仿/醇体系,就用氯仿拌. 5, 装柱: A, 用溶剂把柱子饱和一次, 因为溶剂和硅胶饱和时放出的热量可 能使产品分解. B,将柱底用棉花塞紧,不必用海沙,加入约 1/3 体积石油醚(氯仿), 装上蓄 液球,打开柱下活塞,将匀浆一次倾入蓄液球内.随着沉降,会有一些硅胶 沾在 蓄液球内,用石油醚(氯仿)将其冲入柱中. C,装柱时一定要保证无气泡,同时 敲打柱体使柱体更均匀,紧凑,装毕,用洗 脱液冲三次. 6, 压实:装柱完后,加入更多的石油醚,用双联球或气泵加压,直至流速恒定. 柱床约被压缩至 9/10 体积.无论走常压柱或加压柱,都应进行这一步,可使分 离 度提高很多,且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂. 7, 上样:干法湿法都可以. A,在硅胶上层加少量无水硫酸钠(以免样品被洗脱 剂冲散)取适量样溶液 上样.上样后,加入一些洗脱剂,再将一团脱脂棉塞至接近 硅胶表面.然后就可 以放心地加入大量洗脱剂,而不会冲坏硅胶表面. B,用少量的 溶剂溶样品加样,加完后将下面的活塞打开,待溶剂层下降至 石英砂面时,再加少 量的低极性溶剂,然后再打开活塞,如此两三次,一般石英 砂就基本是白色的了.加 入淋洗剂,一开始不要加压,等溶样品的溶剂和样品层 有一段距离(2～4cm 就够 了) ,再加压,这样避免了溶剂(如二氯甲烷等)夹带 样品快速下行. 8, 过柱和收集:柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡.太低的洗脱强度 并 不好,推荐用梯度洗脱.收集的例子:10mg 上样量,1g 硅胶 H,0.5ml