8.5体内方法评价.pdf

体内药物分析方法验证 内 容 (一 体内分析方法的建立 ) (二 体内分析方法的验证 ) 体内药物分析方法类型 常用的检测方法: 1）色谱分析法；2 ）免疫分析法；3 ）生物学方法  气相色谱法；高效液相色谱法 n  色谱-质谱联用（HPLC-MS , GC-MS）  具有较高的灵敏度、准确度和准确性， 可用于大多数小分子药物的检测。  液质联用技术LC-MS与LC-MS/MS，已 经成为体内药物分析检测的首选方法。 体内药物分析方法类型  放射免疫分析法（RIA）  酶免疫分析法（EIA）  荧光免疫分析法（FIA）  具有一定的特异性，灵敏度高  多用于蛋白质、多肽等生物大分子 类物质的检测  微生物学方法可用于抗生素类药物  特异性较差，应用较少  已逐渐被特异性高的色谱分析法取代 体内药物分析方法建立 (二) 分析方法建立的一般程序  以色谱分析法为例 1. 色谱条件的筛选 取待测物、内标的标准物质，确定最佳分析检测条件 考察项目：色谱柱的型号、流动相组成及其流速、柱温 、进样量、内标物质的浓度及其加入量 目标：待测物及内标有良好的色谱参数；具有适当的保 留时间以避开内源性物质的干扰；有足够的方法灵敏度 体内药物分析方法建立  试剂与溶剂试验：取待测药物的非生物介质溶液（通常 为水溶液），按照拟定的分析方法进行试验，要求空白试 剂色谱峰如果出现的话，不干扰药物的测定；  生物介质试验：取空白生物介质，如空白血浆，按照拟 定的分析方法进行试验，要求内源性物质在待测物及内标 的保留时间处无干扰；  质控样品试验：取空白生物介质，根据实际生物样品中 药物的预期浓度范围，加入待测药物的标准物质，制成标 准样品和质控样品（quality control，QC），考察各项技 术指标，需要符合要求； 标准添加系列待测 药物的标准工作液 标准添加，独立配 制的待测药物标准 工作液，高、中、 低三水平 空白 空白 生物 生物 介质 介质 标准样品（calibration 质控样品（Quality control， standard ），至少6个浓度 QC），高、中、低三个浓度 体内药物分析方法建立 3. 实际样品  代谢产物对待测物、内标物的干扰 的测试  配伍用药的