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（并购重组）SDSPAGE 检测 重组蛋白 SDS检测重组蛋白 一、实验目的 ①掌握 SDS的基本原理 ②掌握 SDS的凝胶制备方法 ③掌握蛋白质的考马斯亮蓝染色法 ④掌握测定重组蛋白分子量的方法。 二、实验原理： 1 、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE） 聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamidegelelectrophoresis），简称PAGE ，是以聚丙烯 酰胺凝胶作为支持介质。聚丙烯酰胺凝胶是由单体的丙烯酰胺（acrylamide）和甲叉双丙烯 酰胺（bisacrylamide）聚合而成，这一聚合过程需要有自由基催化完成。催化剂过硫酸铵 （AP ）可产生自由基，而加速剂四甲基乙二胺（TEMED ）可催化过硫酸铵加速自由基的产生， 这样就可以形成丙烯酰胺长链，同时甲叉双丙烯酰胺在不断延长的丙烯酰胺链间形成甲叉键 交联，从而形成交联的三维网状结构。氧气对自由基有清除的作用，在制备聚丙烯酰胺凝胶 时通常要进行抽气，或者用水或正丁醇隔绝氧气。 聚丙烯酰胺凝胶的孔径可以通过改变丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺单体的浓度来控制，丙 烯酰胺的浓度可以在 3~30% （V/V ）之间。低浓度的凝胶具有较大的孔径，如3% （V/V ）的聚 丙烯酰胺凝胶对蛋白质没