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（生物科技行业）生化及分 子生物学大实验 实验 20 质粒 DNA 的提取和鉴定 授课题目：质粒 DNA 的提取和鉴定（6 学时） 授课对象：生科专业 授课教师： 教学目标及基本要求： 1 、学习和掌握快速提取质粒DNA 的原理和方法。 2 、学习和掌握质粒DNA 的鉴定。 3 、采用开放性实验教学。 教学内容提要及时间分配： 1 、实验原理讲解：8 分钟 碱变性法提取质粒 DNA 是基于染色体 DNA 和质粒 DNA 的变性和复性的差异而达到分离的目 的。在pH 值高达 12.6 的碱性环境中，染色体DNA 的氢键断裂，双螺旋结构解开；质粒DNA 的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的俩条链不会完全分离。当用pH 值 4.8 的KAc 或 NaAc 高盐缓冲液调节其pH 值到中性时，变性的质粒 DNA 又恢复到原来的构型，保存在溶 液中；而线状染色体DNA 则不能复性，形成缠绕的网状物,通过离心，染色体 DNA 和不稳定 的大分子RNA 、蛋白质-SDS 复合物壹起沉淀下来而被除去，用乙醇或异丙醇将溶于上清液中 的质粒DNA 沉淀，再用 RNase 除去RNA ，即可获得较纯净的质粒DNA 。 2 、实验试剂和器材6 分钟 溶液Ⅰ：50mmol/L 葡萄糖，25mmol/LTris.Cl(pH8.0) ，1