Nur77-GRP78通路与糖尿病心肌缺血再灌注损伤敏感性增加的关系.pdf

目 录 中文摘要I 英文摘要III 常用缩写词中英文对照表VI 前 言1 1 材料与方法2 1.1 实验材料2 1.2 实验方法3 1.3 统计学分析12 2 结 果13 2.1 各组间Annexin-VFITC/PI 双染法检测细胞凋亡比较13 2.2 各组间分光光度法检测Caspase3 活性比较13 2.3 各组间JC-1染色法检测线粒体膜电位比较14 2.4 荧光显微镜下各组间Nur77、GRP78 的亚细胞分布比较15 2.5 各组间细胞Nur77、GRP78相对表达水平的比较18 2.6Co-IP 法检测Nur77 与GRP78结合情况19 3 讨 论21 4 结 论23 参考文献24 综 述27 致 谢36 个人简介37 山西医科大学硕士学位论文 Nur77-GRP78通路与糖尿病心肌缺血再灌注损伤敏感性增加的 关系 摘 要 目的： 研究Nur77 与GRP78 在糖尿病心肌缺血再灌注损伤敏感性增加中的作用，以及上 述过程发生的潜在分子通路。 方法： 分别将正常、高糖培养基中培养的H9C2 心肌细胞置于无氧条件下进行培养2h 建立心肌缺血再灌注 （I/R）模型，得到正常培养+缺氧诱导组 （NC+I 组，n 9）和 高糖培养+缺氧诱导组（H/H+I 组，n 9）；正常细胞作为空白对照组（NC 组，n 9）。 用Annexin-VFITC/PI 双染法、分光光度法测Caspase3 活性及JC-1染色法测线粒体 膜电位，评估各组凋亡差异;用荧光染色法、Westernblot 法检测胞内Nur77、GRP78 的分布与相对表达量，并用Co-IP 法测定Nur77 与GRP78在胞内的结合情况。 结果： 检测各组心肌细胞的凋亡差异：与 NC 组相比，其他两组 （NC、H/H+I）细胞 凋亡明显增加（P0.01）；与 NC+I 组相比，H/H+I 组细胞凋亡明显增加（P0.01）。 检测各组细胞Nur77、GRP78亚细胞分布比较：与 NC 组相比，NC+I 组及 H/H+I 组细胞核周围Nur77 分布明显增加 （P0.01）； 与 NC+I 组相比，H/H+I 组细胞 核周围Nur77 分布明显增加 （P0.05）。与 NC 组相比，NC+I 组及 H/H+I 组细 胞 线粒体周围Nur77 分布明显增加 （P0.01）； 与 NC+I 组相比，H/H+I 组细胞 粒体周围Nur77 分布明显增加 （P0.01）。与 NC 组相比，其他两组细胞 线粒体 周围GRP78 分布明显增加 （P0.05）； 与 NC+I 组相比，H/H+I 组细胞GRP78 线粒体周围分布稍有增加 （P0.05）。与 NC 组相比，其他两组细胞内质网GRP78 I 山西医科大学硕士学位论文 分布明显增加 （P0.01）； 与 NC+I 组相比，H/H+I 组细胞内质网GRP78分布明 显增加 （P0.01）。检测各组细胞Nur77、GRP78相对表达水平可得：与 NC 组相 比，其他两组 （NC、H/H+I）细胞 Nur77 表达明显升高 （P0.01）；与 NC+I 组 相比，H/H+I 组细胞Nur77 表达明显升高 （P0.05）。与 NC 组相比，其他两组细 胞 GRP78表达明显升高 （P0.05）；与 NC+I 组相比，H/H+I 组细胞GRP78表达 明显升高 （P0.01）。检测各组细胞IP 反应后裂解液中Nur77 与GRP78 的含量： 与 NC 组相比，NC+I 组及 H/H+I 组IP 反应后Nur77含量无明显增加 （P0.05）； 与 NC+I 组相比，H/H+I 组IP 反应后Nur77 含量无明显增加 （P0.05）；与 NC 组相比，NC+I 组及 H/H+I 组IP 反应后GRP78含量明显增加（P0.01）；与 NC+I 组相比，H/H+I 组IP 反应后GRP78含量明显增加 （P0.01）。 结论： 正常心肌细胞I/R 以及高糖培养下的心肌细胞I/R 敏感性增加均与细