基于聚多巴胺纳米颗粒和功能核酸的荧光生物传感器的构建及应用.pdfVIP

目 录 中文摘要I 英文摘要 III 常用缩写词中英文对照表 VI 第一部分 基于核酸适配体-聚多巴胺纳米复合物的荧光生物传感器检测赭曲霉素A 1 前 言 1 1 材料与方法 2 1.1 试剂与仪器 2 1.2 实验方法 3 2 结果与讨论 3 2.1 PDANS 的形貌及光谱表征 3 2.2 实验原理 4 2.3 实验可行性分析 4 2.4 实验条件优化 5 2.5 传感器的灵敏度分析 6 2.6 传感器的特异性分析 7 2.7 传感器的初步实际应用 8 3 小 结 8 第二部分 基于银离子介导的荧光增强型DNA 酶生物传感器用于半胱氨酸的放大 检测 9 前 言 9 1 材料与方法 10 1.1 试剂与仪器 10 1.2 实验方法 11 2 结果与讨论 11 2.1 检测原理 11 2.2 不同金属离子对DNA 酶活性的影响 12 2.3 传感体系检测Cys 的可行性分析 13 2.4 实验条件的优化 13 2.5 传感器的灵敏度 14 2.6 传感器的选择性 16 2.7 传感器的初步实际应用 17 3 小 结 17 参考文献 18 综述 24 致谢 53 个人简介 54 山西医科大学硕士学位论文 基于聚多巴胺纳米颗粒和功能核酸的荧光生物传感器的构建 及应用 摘 要 目的： 生物传感技术是通过多学科交叉融合而得到迅速发展的新型分析技术，得益于 其灵敏度高、选择性好且检测流程便捷、省时等独特优势，该技术在食品安全、医 学诊断与环境监测等多个领域被广泛应用。随着生命科学的不断进步与飞速发展， 实现对不同生物分子的高灵敏、高通量的检测具有十分重要的意义。然而，目前的 一些生物传感器对于痕量生物分子的检测仍然不够精确，并且假阳性信号时有发生。 因此，本论文基于聚多巴胺纳米颗粒高的荧光猝灭性能及功能核酸的特异性识别能 力，实现对不同生物分子的痕量精准检测。 1.第一部分，我们基于聚多巴胺纳米颗粒优越的荧光猝灭性能以及核酸适配体 对于目标物的特异性识别能力，设计了一种灵敏度高、选择性好的荧光传感器用于 赭曲霉素（OTA ）的检测。 2.第二部分，我们基于Ag+ 可以调节Mgzyme 的催化活性以及半胱氨酸与Ag+ 高亲和力的特性，构建了一种高灵敏荧光生物传感器用于半胱氨酸（Cys ）的放大 检测。 方法： 1. 以多巴胺为原料合成了荧光猝灭性能良好的聚多巴胺纳米颗粒 PDANS （polydopamine nanoparticles ），并在可特异性识别OTA 的核酸适配体的5 末端标 记荧光素（FAM ）。不存在OTA 时，其核酸适配体通过 π-π 堆积作用吸附于PDANS 上。加入OTA 后，核酸适配体特异性识别并结合OTA ，从而诱导核酸适配体从无 规则状态折叠为G- 四链体结构，该结构与PDANS 的吸附力减弱。 I 山西医科大学硕士学位论文 2.将两端分别标记有荧光基团（FAM ）与猝灭基团（BHQ1 ）的分子信标作为 底物链并结合DNAzyme 的循环放大特性设计了催化分子信标体系（CAMB ）。由 + + 于Ag 可以和 Mgzyme 催化活性中心的 C 碱基结合形成 Ag -Mgzyme 复合物，故 Mgzyme 的催化活性被抑制。加入 Cys 后，Cys 与 Ag+ 强的结合力破坏了 +