黄芪甲苷对纳米氧化锌所致神经细胞毒性的保护作用及机制研究.pdf

目 录 摘 要I Abstract IV 常用缩写词中英文对照表VII 前 言 1 第一部分 黄芪甲苷降低纳米氧化锌引起的神经细胞毒性 3 1 材料与方法 3 1.1 实验材料 3 1.2 主要仪器 3 1.3 细胞系与细胞培养 4 1.4 CCK 8 法检测细胞毒性 4 1.5 LDH 法检测细胞毒性 4 1.6 统计分析 5 2 结 果 6 2.1 黄芪注射液降低纳米氧化锌诱导的神经细胞毒性 6 2.2 黄芪甲苷降低纳米氧化锌诱导的神经细胞毒性 6 3 讨 论 9 4 结 论 10 第二部分 黄芪甲苷对纳米氧化锌所致的细胞凋亡和自噬的影响 11 1 材料与方法 11 1.1 实验材料 11 1.2 主要仪器 12 1.3 Annexin V-FITC/PI 双染法检测细胞凋亡 12 1.4 Western blot 检测凋亡与自噬相关蛋白表达 12 1.5 免疫荧光法检测细胞自噬小体变化 15 1.6 CCK 8 法、AnnexinV-FITC/PI 双染法检测3-MA 和RAPA 作用，对细胞增殖 抑制作用和细胞凋亡变化的影响 15 1.7 统计分析 15 2 结 果 17 2.1 黄芪甲苷增强纳米氧化锌诱导的细胞凋亡 17 2.2 黄芪甲苷增强纳米氧化锌诱导的细胞凋亡相关蛋白的表达 18 2.3 黄芪甲苷增强纳米氧化锌诱导的细胞自噬 19 2.4 黄芪甲苷通过诱导自噬来减弱纳米氧化锌造成的神经细胞毒性 22 3 讨 论 24 4 结 论 26 第三部分 黄芪甲苷增强纳米氧化锌诱导的细胞线粒体自噬 27 1 材料与方法 27 1.1 实验材料 27 1.2 主要仪器 27 1.3 Western blot 检测细胞线粒体自噬相关蛋白PINK1, Parkin 的表达 28 1.4 免疫荧光法检测细胞内线粒体自噬的变化 29 1.5 NAO 法检测线粒体质量 30 1.6 活性氧检测试剂盒测定细胞内ROS 水平变化 30 1.7 JC-1 检测细胞内线粒体膜电位水平变化 31 1.8 Fluo-4 AM 荧光法检测细胞内钙离子水平变化 32 1.9 统计分析 32 2 结 果 33 2.1 黄芪甲苷增强纳米氧化锌诱导的细胞线粒体自噬 33 2.2 黄芪甲苷减弱纳米氧化锌造成的细胞线粒体损伤 35 3 讨 论 38 4 结 论 40 全文结论 41 参考文献 42 综 述 50 致 谢 69 个人简介 71 山西医科大学硕士学位论文 黄芪甲苷对纳米氧化锌所致神经细胞毒性的保护作用 及机制研究 摘 要 目的： 纳米氧化锌 （ZnONPs ）作为一种常见的纳米材料，广泛应用于生物医药、食品 等领域，其潜在的神经毒性越来越受到人们的重视。传统中药黄芪具有补气升阳、益 气固表之功效。现代药理学研究证明黄芪及其活性成分具有强心、抗炎、抗氧化、抗 病毒、免疫调节及促进中枢神经系统再生与修复等药理作用。课题组前期研究发现， ZnONPs 对 SH-SY5Y 神经细胞能诱导线粒体途径介导的凋亡从而表现出细胞毒性。 本研究旨在探索黄芪活性成分对ZnONPs 所致神经细胞毒性的保护作用，并在此基础 上进行相应的机制研究，以期为黄芪在神经保护等领域的科学研究奠定基础。 方法： 1. 选择人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y 为实验对象，通过CCK 8 法、LDH 法检 测黄芪及黄芪多糖、黄芪甲苷 （ASIV）、毛蕊异黄酮等活性成分作用前后，ZnONPs （50 nm ）对SH-SY5Y 细胞存活率的影响。 2. 利用 Annexin V