黄芪总黄酮联合顺铂对喉鳞癌抗癌作用的研究.pdf

目 录 中文摘要I 英文摘要IV 常用缩写词中英文对照表VII 前 言1 第一部分 黄芪总黄酮联合顺铂对LSCC移植瘤模型抗癌作用的药效学研究3 1 材料与方法3 1.1 实验材料3 1.2 实验方法4 2 结 果6 2.1 TFA与CDDP联合应用的体内药效学研究结果6 2.2 TFA对CDDP化疗引起的肾毒性的影响7 第二部分 黄芪总黄酮联合顺铂对LSCC移植瘤模型抗癌作用的网络药理学研究9 1 材料与方法9 1.1 实验材料与仪器9 1.2 软件及数据库9 1.3 实验方法9 2 结 果12 2.1 TFA原型成分鉴定结果12 2.2 网络药理学分析结果13 3 讨 论19 4 结 论23 参考文献24 综 述28 致 谢36 个人简介39 山西医科大学硕士学位论文 黄芪总黄酮联合顺铂对喉鳞癌抗癌作用的研究 摘 要 目的： 喉鳞状细胞癌 （laryngeal squamouscellcarcinoma,LSCC）是最常见的头颈部肿 瘤。黄芪提取物在肿瘤进展的调控中起重要作用。然而，黄芪提取物在LSCC 中的 作用及相关机制尚不清楚。而黄酮类化合物是黄芪提取物中主要的生物活性物质， 本研究主要探讨： （1）黄芪总黄酮 （Astragali radix total flavonoid, TFA）和顺铂 （CDDP）联合使用对LSCC 裸鼠异位移植瘤模型的影响，为临床上LSCC 化学治 疗增敏以及高效低毒治疗策略奠定基础； （2）TFA 发挥抗LSCC 作用可能的调控 机制。 方法： 首先构建LSCC 移植瘤模型，通过药效学方法评价TFA 和CDDP 联合应用对 LSCC 小鼠模型的抑制作用。然后，采用超高效液相色谱- 串联质谱法 （Ultra-high-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry ， UPLC-MS/MS）确定TFA 的体内原型。最后，通过对LSCC 芯片、RNA 测序数据 和TFA 主要生物活性成分的整合分析，确定潜在的药物靶点。在此基础上，本项研 究还构建了基于这个原型和潜在药物靶点的蛋白-蛋白相互作用 （Protein-protein interaction，PPI）网络、化合物-靶点网络 （Compound-target network，C-Tnetwork） 和靶点-通路网络 （Target-pathway network，T-Pnetwork），以此来识别主要的靶点 和通路。 结果： 动物实验表明，TFA与CDDP具有显著的协同抗肿瘤活性，且TFA能减轻CDDP 化疗引起的肾毒性，并改善LSCC荷瘤小鼠的生存。与CDDP 单独给药组相比，24mg I 山西医科大学硕士学位论文 /kg TFA+1mg/kg CDDP 组与48mg/kg TFA+1mg/kg CDDP 组有较高的肿瘤抑制率 （分别为29.3%、40.2%vs.26.8%）。 利用UPLC-MS/MS，本研究从实验小鼠血清中鉴定出8种TFA 成分：芒柄花 黄素、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、7,2-二羟基-3,4-二甲氧基-黄烷、7,2- 二羟基-3,4-二甲氧基-黄烷苷、3-羟基-9,10-紫檀烷、紫檀烷苷。接下来，运用网络 药理学预测了TFA 8种主要成分的184 个蛋白靶点 （药物靶点），并从两个数据集 收集了1096 个LSCC 相关靶点 （即疾病靶点，其中114 个靶点来自网络数据库 DisGeNet、996个靶点是芯片数据和RNA 测序数据的交集），Venn 分析确定了19 个候选靶点 （药物靶点和疾病靶点的交集）：EGFR、ERBB2、ERBB4、MMP1、 MMP3、NRAS、NOX4、TOP2A、DRD1、MAOB、ACHE、CA9、ALDH1A1、ALDH1A2、 ALOX12B、ALOX15、DCT、CYP1B1和D