黄芩苷通过NF-κB非经典通路调控HOKs的MASPIN和IKKα的表达.pdf

目录 中文摘要I 英文摘要III 常用缩写词中英文对照表V 前 言1 第一部分3 黄芩苷对LPS刺激的HOKs 中相关因子表达的影响3 1 材料与方法3 1.1实验试剂与仪器3 1.2HOKs 的培养、传代与冻存4 1.3体外局部模拟OLP 炎性环境5 1.4 CCK-8法检测不同浓度的BAI 对HOKs增殖的影响6 1.5ELISA 法检测不同浓度黄芩苷对LPS刺激下HOKs 中炎性因子的表达情况.7 1.6Real-timePCR检测黄芩苷对LPS刺激下的HOKs 中的相关因子的基因表达 水平的调控作用7 1.7Western Blot检测黄芩苷对LPS刺激下的HOKs 中的相关因子的蛋白表达水 平的调控作用9 1.8统计学分析10 2 结 果10 2.1OLP 炎性环境的建立 10 2.2 黄芩苷对LPS刺激下HOKs 中相关因子表达水平的调控作用11 第二部分11 黄芩苷调控HOKs 中MASPIN 的分子机制的研究15 1 材料与方法15 1.1NF-κB 抑制剂 （BAY 11-7082）对HOKs增殖影响CCK-8细胞毒性实验...15 1.2NF-κB抑制剂 (BAY 11-7082) 对LPS刺激下HOKs 中IL-6和TNF-α表达的 酶联免疫吸附实验 （ELISA）15 1.3RT-PCR 实验检测黄芩苷对预先加入NF-κB抑制剂(BAY 11-7082)后LPS刺 激下的HOKs 中的相关因子的基因表达水平的调控作用16 1.4Western Blot 实验检测黄芩苷对预先加入NF-κB 抑制剂(BAY 11-7082)后的 LPS刺激下的HOKs 中相关因子的蛋白表达水平的调控作用16 1.5黄芩苷对预先加入NF-κB抑制剂(BAY 11-7082)的LPS刺激下HOKs 中IL-6 和TNF-α表达的酶联免疫吸附实验 （ELISA）16 2 结 果17 2.1NF-κB 抑制剂(BAY 11-7082)对HOKs增殖的影响17 2.2NF-κB抑制剂(BAY 11-7082)对LPS刺激下的HOKs 中IL-6和TNF-α表达的 影响17 2.3RT-PCR 及Western Blot 检测黄芩苷对预先加入NF-κB 抑制剂 （BAY 11-7082）的LPS刺激下的HOKs 中相关因子表达水平的影响18 2.4 黄芩苷对预先加入NF-κB 抑制剂(BAY 11-7082)后的LPS刺激下的HOKs 中IL-6和TNF-α表达的影响20 讨 论21 结 论23 参考文献24 综 述29 致 谢41 个人简历42 研究成果42 山西医科大学硕士学位论文 黄芩苷通过NF-κB非经典通路调控HOKs的MASPIN和IKKα 的表达 摘 要 目的： 黄芩苷 （Baicalin，BAI）是从中草药黄芩的干燥根中提取的一种黄酮类化合物， 众多研究显示其有很好的抗炎功效。前期研究发现IκB 激酶α（IKKα）介导的乳 腺丝氨酸蛋白酶抑制剂 （Mammary SerineProteaseInhibitor,MASPIN）参与了口腔 扁平苔藓 （Orallichenplanus，OLP）的炎症过程。本研究旨在探讨黄芩苷对LPS 刺激的HOKs 的炎症反应的抑制作用及经由NF-κB 非经典通路调控MASPIN 及 IKKα的分子机制，为口腔黏膜的炎性疾病如口腔扁平苔藓 （OLP）的药物治疗提 供新的研究思路。 材料与方法： 使用10µg/ml 的LPS刺激人口腔角质细胞 （human oralkeratinocytes，HOKs）， 体外模拟OLP 的炎性环境。使用细胞增殖毒性试验CCK-8法检测不同浓度的黄芩 苷对HOKs 的毒性作用；在LPS刺激的HOKs 中预先加入不同浓度的黄芩苷，应用