骨髓间充质干细胞来源的微颗粒减轻过氧化氢诱发H9C2心肌细胞损伤的作用及其机制的初步研究.pdf

目 录 中文摘要 I 英文摘要V 常用缩写词中英文对照表IX 前言 1 第一部分 大鼠骨髓间充质干细胞及其来源微颗粒的分离和鉴定4 1 材料与方法4 1.1 材料4 1.2 方法6 2 结果 11 2.1 MSCS 的形态学特征 11 2.2 MSCS 的生长曲线 11 2.3 MSCS 表面标记的检测 12 2.4 MSCS 的成骨和成脂诱导分化 13 2.5 MSC-MPS 流式计数和蛋白含量检测 13 2.6 MSC-MPS 表面标记的流式检测 14 第二部分 骨髓间充质干细胞来源的微颗粒减轻过氧化氢诱发H9C2 心肌细胞损 伤的作用及其机制的初步研究 15 1 材料与方法 15 1.1 材料 15 1.2 方法 17 2 结果24 2.1 不同浓度H O 对H9C2 心肌细胞存活率的影响24 2 2 2.2 MSC-MPS 预处理对H9C2 心肌细胞的存活率的影响24 2.3 MSC-MPS 预处理对H9C2 心肌细胞上清液中LDH 以及细胞内SOD、MDA 和GSH-PX 的影响25 2.4 MSC-MPS 预处理对H9C2 心肌细胞内ROS 含量的影响26 2.5 MSC-MPS 预处理对H9C2 心肌细胞线粒体膜电位的影响27 2.6 MSC-MPS 预处理对H9C2 心肌细胞内CASPASE-9 和CASPASE-3 活性的影 响29 2.7 MSC-MPS 预处理对H9C2 心肌细胞内BCL-2 和BAX 表达的影响30 3 讨论32 4 结论34 参考文献35 综述39 致谢52 个人简介54 山西医科大学硕士学位论文 骨髓间充质干细胞来源的微颗粒减轻过氧化氢诱发H9C2 心肌细胞损伤的作用及其机制的初步研究 摘 要 目的 收集并纯化间充质干细胞来源的微颗粒（MSC-MPs ），观察其对过氧化氢 （H O ）诱导H9C2 心肌细胞损伤的保护作用，并初步研究其机制。 2 2 方法 使用全骨髓贴壁法分离纯化MSCs，运用显微镜观察细胞形态学变化、流式 细胞术鉴定表面抗原、细胞计数法绘制细胞生长曲线以及诱导MSCs 成骨和成脂 分化四种方法来对MSCs 进行鉴定。 使用无血清培养基处理第5 代MSCs 48 h ，收集上清液后梯度离心获取MSC- MPs 。利用BCA 法检测MSC-MPs 的蛋白含量，利用流式细胞术检测MSC-MPs 的大小、数量和表面抗原。 使用80 μmol·L-1 的H O 处理细胞3 h ，诱导H9C2 细胞氧化应激损伤模型， 2 2 研究24 和48 μg·ml-1 的MSC-MPs 预处理H9C2 心肌细胞24 h 以后，其对细胞 存活率、细胞释放的乳酸脱氢酶等指标的影响，包括：使用 CCK-8 法检测细胞 存活率，使用检测试剂盒分别检测细胞中的MDA 、SOD、GSH-Px 以及细胞LDH 释放量，运用JC-1 检测试剂盒和ROS 检测试剂盒检测ROS 相对含量和线粒体 膜电位水平，使用 Caspase-3 检测试剂盒和 Caspase-9 检测试剂盒检测细胞中 Caspase-3 和Caspase-9 的含量，使用实时荧光定量PCR 检测细胞中的PTEN 、 Bcl-2 和Bax 的表达情况。 实验共分为5 组： （1） 对照组（Control ）：加入培养基和与实验组等体积PBS ； （2 ） 心肌细胞损伤组 （H O ）：加入含80 μmol·L-1 过氧化氢的培养基； 2 2 （3 ） MPs （24 μg·ml-1 ）组：使用含24 μg·ml-1 的MSC-MPs 预处理H9C2 I 山西医科大学硕士学位论文 细胞24 h ，然后加入含80 μmol·L-1 过氧化氢的培养基; （4 ） MPs （48