Rb在人骨肉瘤增殖、迁移和侵袭中的作用及其相关机制研究.pdf

目 录 中文摘要1 英文摘要3 常用缩写词中英文对照表5 前 言6 第一部分 Rb在骨肉瘤细胞系和骨肉瘤临床标本中的表达比较7 1 材料与方法7 1.1组织样本和细胞系来源7 1.2 主要耗材仪器7 1.3主要试剂8 1.4 总RNA 的提取8 1.5总RNA 逆转录成cDNA9 1.6cDNA 进行qRT-PCR9 2 结 果10 2.1Rb 在骨肉瘤各细胞系中低表达10 2.2Rb 在骨肉瘤组织中低表达10 3 讨 论11 4 结 论12 第二部分 Rb在体外对骨肉瘤细胞增殖、迁移及侵袭作用的影响12 1 材料与方法12 1.1主要耗材仪器12 1.2 主要试剂13 1.3细胞培养与慢病毒转染13 1.4Rb、Ezrin 基因的qPCR 反应14 1.5细胞增殖实验15 1.6 细胞迁移实验15 1.7 细胞侵袭实验15 1.8Western-Blot 凝胶电泳16 2 结 果18 2.1成功构建Rb 低表达模型和Rb 过表达模型 18 2.2Rb 过表达可以抑制骨肉瘤细胞的增殖18 2.3Rb 过表达可以抑制骨肉瘤细胞的迁移19 2.4Rb 过表达可以抑制骨肉瘤细胞的侵袭20 2.5Rb 过表达可以抑制Ezrin 的mRNA 表达20 2.6Rb 过表达可以抑制Ezrin 的蛋白表达21 3 讨 论21 4 结 论22 第三部分 Rb在体内对骨肉瘤增殖及转移的影响22 1 材料与方法23 1.1主要耗材仪器23 1.2 主要试剂23 1.3 建立异种移植瘤模型23 1.4qPCR 检测瘤体内Rb、Ezrin 的mRNA 含量24 2 结 果25 2.1Rb 在体抑制裸鼠瘤体生长25 2.2Rb 过表达可以抑制Ezrin 的mRNA 表达26 3 讨 论27 4 结 论28 参考文献28 综 述30 致 谢38 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果39 个人简历40 山西医科大学硕士学位论文 Rb在人骨肉瘤增殖、迁移和侵袭中的作用及其相关机制研究 摘 要 目的： 探讨视网膜母细胞瘤基因 （Rb）对人骨肉瘤增殖、迁移和侵袭作用的影响，并 从分子层面分析Rb 分子对人骨肉瘤生物学性状的影响。 方法： （1）检测Rb 在正常成骨细胞 （hFOB1.19）和骨肉瘤细胞系 （U2-OS、Saos-2 及MG-63）中RNA 含量，同时检测Rb 在正常骨组织和人骨肉瘤组织中表达量， 比较其表达量差异。 （2）选取Saos-2 细胞，利用慢病毒构建Rb 高表达和低表达 模型，对照组转染空载体。检测高表达模型和低表达模型中Rb 对骨肉瘤细胞增殖 （CCK-8实验）、迁移（划痕实验）和侵袭（Transwell 实验、qRT-PCR、Western-bolt） 等生物学特性的影响。 （3）慢病毒转染Saos-2 骨肉瘤细胞后构建骨肉瘤裸鼠移植 瘤动物模型，2 周后开始测量和比较各组瘤体的体积和重量，qRT-PCR 检测裸鼠瘤 体内Rb 和细胞绒毛蛋白基因(Ezrin)的表达量。 结果： （1）qRT-PCR 实验结果显示，Rb 在人骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞系中的表达量均 较正常骨组织 （P0.001）和成骨细胞 （P0.001）中显著降低。 （2）利用慢病毒载 体来转染Saos-2 骨肉瘤细胞，转染效率可达90%以上，并用qRT-PCR 检测其表达 （P0.05）。 （3）体外结果显示，Rb 组可抑制骨肉瘤细胞增殖 （p≤0.001）、迁移 （p0.005）和侵袭 （p0.005），Sh-Rb 组可促进骨肉瘤细胞增殖 （p0.001）、迁移 （p0.05）和侵袭 （p0.001）。 （4）体外qRT-PCR 结果显示，Rb 组可抑制Ezrin 的mRNA 表达 （P0.05），Sh-Rb 组可促进Ezrin 的mRNA 表达 （P0.05