医学分子生物学技术 蛋白质.pptx

医学分子生物学实验技术;第一章 蛋白质的分离与纯化;第一章 蛋白质的分离与纯化;第一章 蛋白质的分离与纯化;6/7/2020;6/7/2020;塔板理论：;塔板理论假设： 1. 在柱内一小段长度H内，组分可以在两相间迅速达到平 衡。这一小段柱长称为理论塔板高度H。 2. 以气相色谱为例，载气进入色谱柱不是连续进行的，而是脉动式，每次进气为一个塔板体积（ΔVm）。 3. 所有组分开始时存在于第0号塔板上，而且试样沿轴（纵）向扩散可忽略。 4. 分配系数在所有塔板上是常数，与组分在某一塔板上的量无关。; 简单地认为：在每一块塔板上，溶质在两相间很快达到分配平衡，然后随着流动相按一个一个塔板的方式向前移动。对于一根长为L的色谱柱，溶质平衡的次数应为： n = L / H n称为理论塔板数。与精馏塔一样，色谱柱的柱效随理论塔板数n的增加而增加，随板高H的增大而减小。;6/7/2020;6/7/2020;6/7/2020;洗脱法也称冲洗法。工作时，首先将样品加到色谱柱头上，然后用吸附或溶解能力比试样组分弱得多的气体或液体作冲洗剂。由于各组分在固定相上的吸附或溶解能力不同，被冲洗剂带出的先后次序也不同，从而使组分彼此分离。流出曲线下图。;顶替法是将样品加到色谱柱头后，在惰性流动相中加入对固定相的吸附或溶解能力比所有试样组分强的物质为顶替剂