StCYS1基因对马铃薯酶促褐变及耐盐的影响.pdfVIP

符号说明 ABTS:2,2-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonicacid),2,2-联氮-双-3-乙基苯并噻 bp:basepairs,碱基对 CP:cysteineproteinase,半胱氨酸蛋白酶 CRISPR/Cas:clusteredregulatory interspaced shortpalindromicrepeats/CRISPR-associated protein ,规律成簇间隔短回文重复序列规律成簇间隔短回文重复序列相关蛋白/ CYS:Cystatin,半胱氨酸蛋白酶抑制子 DPPH: 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼 FRAP:ferric reducing ability of plasma,铁还原能力 MDA:malondialdehyde,丙二醛 OD:opticaldensity, 光密度值 PCD:programmed celldeath,细胞程序性死亡 PIs:proteinaseinhibitors,蛋白酶抑制子 PPO:polyphenol oxidase, 多酚氧化酶 PVPP:crosslinkingpolyvinylpyrr olidone,交联聚乙烯吡咯烷酮 SPAD:soil andplant analyzer develotrnent,土壤与作物分析开发 TPTZ:2,4,6-Tris(2-pyridyl)-s-triazine,2,4,6-三吡啶基三嗪唑啉-6-磺酸 目 录 中文摘要I AbstractIII 1前言1 1.1植物蛋白酶抑制子简介1 1.2植物半胱氨酸蛋白酶抑制子的作用1 1.3马铃薯蛋白酶抑制子的研究现状3 1.3.1PIs与马铃薯块茎抗褐变的关系4 1.3.2PIs与马铃薯响应植物胁迫的关系5 1.4 CRISPR/Cas9技术在马铃薯中的应用6 1.4.1CRISPR/Cas9技术简介6 1.4.2 CRISPR/Cas9技术在马铃薯中的应用现状8 1.5研究内容、目的及意义9 1.5.1研究目的及意义9 1.5.2 本课题研究的内容10 2材料与方法11 2.1实验材料11 2.1.1植物材料11 2.1.2 菌株与质粒11 2.1.3 引物11 2.2实验试剂12 2.3 实验仪器13 2.4 实验方法14 2.4.1超表达StCYS1对马铃薯块茎褐变的影响14 2.4.2超表达StCYS1对马铃薯植株抗盐性的影响17 2.4.3StCYS1 的CRIPR/Cas9基因编辑载体的构建 19 2.4.4 马铃薯StCYS1突变体植株的获得及块茎褐变表型分析22 2.5 实验数据分析统计23 3 结果与分析24 3.1超表达StCYS1对马铃薯块茎酶促褐变的影响24 3.1.1超表达StCYS1对马铃薯块茎产量的影响24 3.1.2 超表达StCYS1对马铃薯块茎StCYS1基因表达量与浆液褐变的影响25 3.1.3超表达StCYS1对马铃薯块茎PPO活性和抗氧化能力的影响26 3.1.4 超表达StCYS1对马铃薯块茎游离氨基酸含量的影响27 3.2 超表达StCYS1对马铃薯植株耐盐性的影响29 3.2.1各马铃薯株系的叶片StCYS1基因表达量与植株耐盐性30 3.2.2 超表达StCYS1对盐处理后马铃薯植株叶绿素含量的影响30 3.2.3超表达StCYS1对盐处理后马铃薯植株H O 含量和MDA含量的影响31 2 2 3.2.4 超表达StCYS1对盐处理后马铃薯植株相对电导率和脯氨酸含量的影响32 3.3StCYS1 CRISPR/Cas9 33 的 基因编辑载体构建 3.3.1StCYS1序列的确定及靶点选择33 3.3.2 双元载体的构建及鉴定34 3.4 马铃薯StCYS1突变体植株的获得及褐变表型分析36 3.4.1马铃薯StCYS1突变体植株的获得36 3.4.2 马铃薯突变体的StCYS1基因表达量及块茎褐变表型分析39 4讨论40 4.1超表达StCYS1基因通过降低马铃薯氨