重组蛋白质表达、复性与纯化.pptxVIP

重组蛋白质的表达、复性与纯化whuang@， 2005为什么要重组基因表达？ 1. 蛋白质功能研究 2. 生物制药和疫苗生产 3.? 疾病的基因治疗 4. 食品、化工用酶制剂 5. 抗虫、抗逆植物改良 6. 细胞代谢产物的富集基因表达体系及优劣势大肠杆菌表达体系蛋白质的复性工作中经常碰到的问题基因表达体系 1. 原核体系2. 真核体系 大肠杆菌 (Escherichia coli)遗传背景清楚，基因工程操作方便，商品化表达载体种类齐全，表达效率高；基本不分泌，易形成包含体(无正确折叠的立体结构)，无加糖等修饰枯草杆菌 (Bacillus subtilis)分泌蛋白质能力强，一般有天然立体结构；无加糖修饰功能，培养液中蛋白酶活性高，重组蛋白易受蛋白酶的水解；质粒不稳定，尚无商品化的表达载体其 他乳酸菌 (Lactic acid bacteria)沙门氏菌 (Salmonella typhimurium)苏云金杆菌 (Bacillus thuringiensis)真核细胞表达体系酵母细胞昆虫细胞植物细胞/组织哺乳动物细胞/组织酵母细胞可生产分泌型蛋白；有天然立体结构，有加糖修饰功能；可进行染色体整合型基因表达;糖链与哺乳动物加工的不一致，培养上清多糖浓度高;商品化表达体系： 酿酒酵母（Saccharomyce cerevisiae）; 毕氏酵母 (Pichia pa