HPLC硬件构造上课讲义.pptVIP

四元低压 单泵 的 HPLC （ Agilent ） 高压输液泵 电磁阀（含四个流路） 分析部分 ? 分析部分主要就是由 检测器 组成。 ? 常用的检测器有紫外检测器、差示折光检 测器、荧光检测器、蒸发－光散射检测器 等。 ? 紫外检测器最为常用。它又可分为可变波 长检测器（ VWD ）和二极管阵列检测器 （ PDA ）。 在同一个轴上有 两个相位相差 180 度 的偏心轮，当其 中一个吸液时，另一个排液。 交替进行 。这样就减 少了输液的脉动。 排空阀（ Purge 阀）起什么作用？ Purge 阀 Purge 阀主要用于两个方面： ? 1 刚开机时，要打开 Purge 阀 ( 逆时针方向拧 180 度 ) ，启动 高压输液泵冲洗约３～ 5min ，排掉一段流动相以去除管 腔中的气泡． ? 2 更换不同的流动相时，要将前面一段流动相排尽。 ? 开启 Purge 阀时，一般用较高的流速（ 5ml/min ）来冲洗 管腔。 混合器 混合器 混合器的作用 ? 混合器主要是用来混匀流动相的。 ? 流动相不均匀对检测影响很大。 ? 混合器通常是通过一些 U 形管来使流动相混 匀，即“蛇形管”模式。也有的是采用一 些过滤介质来实现的。由于在混合过程中 没有动力装置，故称为“静态混合”。 ? 此外，好的混合器可使仪器系统压力比较 恒定。 岛津 20AT 型 HPLC 输液泵 脱气机 手动进样器 柱温箱 差示折光检测器 紫外检测器 混合器 脱气机 脱气机原理 ? 为什么要脱气？ 因为流动相中可溶解一定的空气。 如果不脱气，在检测器中气泡会冒出来，严重影 响检测基线。 ? 脱气机由真空泵、真空度检测器及脱气腔组成。 ? 流动相通过含氟树脂为材料的管状膜，其中的气 体可通过膜被真空泵抽去，而液体保留下来。 脱气机内部构造 岛津仪器将柱温箱和手 动进样器设计为一体。 这一设计的最大弊 端是维护手动进样器十 分不便！ 7725i 手动进样阀原理 7725i 手动进样阀实图 柱温箱 ? 柱温箱是保障色谱柱在恒定的温度下工作 的前提条件，也是 HPLC 结果重现性的保 障． ? 没有柱温箱是很难进行定性定量分析 的．因为温度可影响物质的保留时间，峰 形等参数． ? 除制备型 HPLC 以外，一般分析型 HPLC 都 要有柱温箱． 国产柱温箱 安捷伦自带的卧式柱温箱 色谱柱 ? 色谱柱可分为正相色谱柱、反相色谱柱、 特殊专用柱（手性色谱柱、离子色谱柱、 氨基酸分析柱、糖类分析柱等） ? 操作仪器前一定要认清是什么型号、什么 材质的色谱柱！否则，乱用流动相，一次 就可导致色谱柱报废！ 如：环糊精为填料 的手性色谱柱，如果流动相含有水，即可 溶解，一次性报废！ 反相色谱柱 ? 目前最常用的为反相色谱柱。 ? 反相色谱柱一般是以硅胶颗料上键合 C18 、 C8 而成。常用的为 C18 。 ? C18 反相色谱柱适合分离很多物质，且色谱 柱较为耐用。 C18 注意事项 ? 但流动相 PH 值一定要保证在 2~8 之间。低于 ２或高于８，色谱柱即遭破坏。 ? 反相色谱柱一定不能用纯水作流动相，否 则键合的 C18 坍塌，报废！ ? 流动相中水的比例最大为 90% 。 液相色谱柱 ? 色谱柱不能震动、跌落！ ? 色谱柱不用时，从仪器上取下后要用适当 的溶剂保存，并在两端拧上堵头！ 红 色 部 分 即 为 堵 头 如何认识不同型号仪器的构造？ ? 无论何种 HPLC ，其结构总离不开高压输液 泵、进样器、柱温箱、检测器几个部分。 ? 搞清仪器不同部分的作用是做好实验和维 护仪器的前提！ 共用一个机箱的串联式二元高压输液泵 （典型代表是安捷伦） 安捷伦 1200 内部构造 二元高压输液泵的 HPLC （ Agilent ） 并联式二元高压输液泵 ? 这种形式的输液泵制造工艺要求比串联泵 更高。 ? Waters 公司是以做并联泵为主要产品的。 ? 岛津近期也推出了并联泵产品，如： LC- 20AD ? 国产 HPLC 中只有极少数厂家生产：如：上 海伍丰、江苏天瑞等。 二元高压 并联泵 HPLC 结构示意图 贮液瓶 高压输液泵 脱气机 检测器 色谱柱 柱温箱 混合器 进样器 电 脑 废液瓶 并 联 泵 结 构 的 高 效 液 相 四流路单高压输液泵的 HPLC （典型代表为安捷伦） 二元高压 并联泵 HPLC 结构示意图 贮液瓶 高压输液泵 电磁阀 检测器 色谱柱 柱温箱 混合器 进样器 电 脑 废液瓶 脱气机 安捷伦 1100 整体结构 安捷伦 1100 内部构造 HPLC 的结构、原理及 日常维护 刘浩然 2013.03.30 内容简介 ? HPLC 的硬件结构 ? HPLC 的原理 ? HPLC 日常维护要点 一、概 述 ? HPLC 即 High perfor