原核生物DNA的复制.docVIP

。 原核生物DNA的复制 1．与复制有关的酶及蛋白质： （1）拓扑异构酶：通过切断并连接DNA双链中的一股或双股，改变DNA分子拓扑构象，避免DNA分子打结、缠绕、连环，在复制的全程中都起作用。其种类有：拓扑异构酶I和拓扑异构酶II，拓扑异构酶I能切断DNA双链中一股并再连接断端，反应不需ATP供能；拓扑异构酶II能使DNA双链同时发生断裂和再连接，需ATP供能，并使DNA分子进入负超螺旋。 （2） 解螺旋酶： DNA进行复制时，需亲代DNA的双链分别作模板来指导子代DNA分子的合成，解螺旋酶可以将DNA双链解开成为单链。大肠杆菌中发现的解螺旋酶为DnaB。 （3） 单链结合蛋白（SSB）：在复制中模板需处于单链状态，SSB可以模板的单链状态并保护模板不受核酸酶的降解。随着DNA双链的不断解开，SSB能不断的与之结合、解离。 （4） 引物酶： 是一种RNA聚合酶，在复制的起始点处以DNA为模板，催化合成一小段互补的RNA。DNA聚合酶不能催化两个游离的dNTP聚合反应，若没有引物就不能起始DNA合成。引物酶能直接在单链DNA模板上催化游离的NTP合成一小段RNA，并由这一小段RNA引物提供3-OH， 经DNA聚合酶催化链的延伸。 （5） DNA聚合酶：是依赖DNA的DNA聚合酶，简称为DNA pol，以DNA为模板，dNTP为原料，催化脱氧核苷酸加到引物或DNA链的3-OH末端，合成互补的DNA新链，即5→3聚合活性。原核生物的DNA聚合酶有DNA polI、DNA pol II和DNA pol III，DNA pol III是复制延长中真正起催化作用的，除具有5→3聚合活性，还有3→ 5 核酸外切酶活性和碱基选择功能，能够识别错配的碱基并切除，起即时校读的作用；DNA pol I具有5→3聚合活性、3→ 5和5→3核酸外切酶活性，5→3核酸外切酶活性可用于切除引物以及突变片段，起切除、修复作用。另外，klenow片断是DNA pol I体外经蛋白酶水解后产生的大片段，具有DNA 聚合酶和3→ 5外切酶活性，是分子生物学的常用工具酶。DNA pol II 在无DNA pol I和DNA pol III时起作用，也具有5→3和3→ 5 核酸外切酶活性。 （6） DNA连接酶：DNA连接酶用于连接双链中的单链缺口，使相邻两个DNA片段的3-OH末端和5-P末端形成3,5磷酸二酯键。DNA连接酶在DNA复制、修复、重组、剪接中用于缝合缺口，是基因工程的重要工具酶。 2．DNA的合成过程：可将复制过程分为起始、延长和终止三个阶段。 复制起始： 精选资料，欢迎下载 。 ，具有特定结构能oriC辨认起始点，合成引发体：在E.coli，复制起始点称为 （1） 蛋白结合于起始点，DnaB蛋白具有解螺旋作用，DnaC蛋白使够被DnaA蛋白辨认结合，DnaB 双链局部被打开，引物酶及其他蛋白加入，形成引发体。DNA进行复制时，首先在拓扑异构酶作用下，使分子的超螺旋构象变DNA 形成单链：2 （）的合成。解螺旋酶在蛋白因子的DNA化，然后在解链酶的作用下，解开双链，才能开始进行DNA结合于处于单链状态模板链上；拓扑异构酶使双链，单链结合蛋白SSB辅助下打开DNA 分子避免打结、缠绕等，在复制全过程中起作用。基，使复制-OH3 合成引物：引发体中的引物酶催化合成RNA引物，由引物提供 （3） 开始进行。领头连和随从链均由引物酶合成引物，随从链在复制中需多次合成引物。 复制延长： ，两个复制叉同时向两个，只有一个起始点oriC） 复制方向：原核生物如E.coli （1 方向进行复制，称为双向复制。的作用下，逐个加聚合酶III 链的延长：按照与模板链碱基配对的原则，在DNA （2）3聚合酶只能催化核苷酸从5→DNA入脱氧核糖核酸，使链延长。由于DNA双链走向相反，3方向合成，领头链的复制方向与解链方向一致，可以连续复制，而另一股模板链沿5→因复制只能在模板链解开一定长度后进行，方向解开，随从链的复制方向与解链方向相反，聚DNAI的即时校读，DNA此随从链的合