（优质医学）经典色谱法液相.ppt

* 样品预处理 七、薄层色谱法的应用 * 依据：固定色谱条件下，相同物质的Rf值相同 供试品 对照药材 对照品 阴性对照 1 2 3 4 （一）定性鉴别 * 1、 限量检查 如：附子中乌头碱的限量检查 1. 乌头碱对照品 2，3，4. 样品 1 2 3 4 （二）定量分析 2、洗脱测定法 准确吸取…直线状点样，…置于…层析缸中，展至14cm，取出晾干，于紫外灯下，用针将Rf值约为0.4的盐酸吗啉双胍谱带划出，用刮刀将谱带全部刮入100 ml容量瓶中，准确加入50ml蒸馏水，振摇…静置…离心。准确吸取上清液…以蒸馏水作参比，在237nm处测其吸光度 盐酸吗啉双胍分析方法研究 * * 3 杂质检查 检查枸橼酸乙胺嗪中的N-甲基哌嗪 1 对照品(50mg/ml) 2 供试品 1 2 如果供试品溶液在对照品溶液相应位置显示相同斑点，其颜色不得深于对照品溶液的主斑点 * 应用实例 （二）化学分离 藏药湿生扁蕾的化学成分研究Ⅰ 中国中药杂志 2004，29（11）：1055 * 小结 经典液相柱色谱的主要用途： 色谱分析前样品预处理、化学分离 熟悉各种柱的使用 掌握常用吸附剂的性质 掌握色谱条件的选择 掌握洗脱规律 * 第3节 平面色谱法 操作形式:平面 流动相：展开剂 操作：点样、展开 驱动力:毛细管力 * 特点：设备简单，分析速度快 应用：中药的定性鉴别 平面色谱法 按固定相类型分类： 硅胶、氧化铝 →薄层色谱法 滤纸 →纸色谱法 聚酰胺薄膜 * 2、比移值（Rf） 可用范围：0.2-0.8 最佳范围：0.3-0.5 1、原点、溶剂前沿、展距 分离的前提： k不同 l0 l 平面色谱法 * 1、Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层板和展开剂的性质有关 2、色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是薄层色谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为 讨 论 3. 相对比移值Rs 讨论 参考物与被测组分在完全相同条件下展开 可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性； 参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分 相对比移值Rs与组分、参考物性质及色谱条件有关，范围可以大于或小于1 2 1 L L R R R f f s = = = 中心的距离 原点到参考物斑点质量 心的距离 原点到组分斑点质量中 （参） （组） * * 薄层色谱法 1、定义：将固定相(吸附剂)均匀地铺在具有光洁表面的薄板上形成薄层，在此薄层上进行色谱分离的方法。 薄板：玻璃、塑料薄膜、铝箔 吸附剂：硅胶、氧化铝 一、概述 二、硅胶薄层色谱法 （一）分类： 硅胶H、硅胶G、硅胶HF254、硅胶GF254 G：指含煅石膏(Gypsum)黏合剂 H：不含黏合剂 F254：含一种在254nm下能发出黄绿 色荧光的无机荧光剂 F365：含荧光剂，365nm紫外光照发光 粒度：10~40μm(250~300目） 含荧光剂的硅胶适用于本身不发光又无适当显色剂显色的物质 * * （二）分离机理 1、样品分子与展开剂分子对硅胶表面硅醇基的竞争吸附 2、展开剂对样品分子的溶解 * （三）操作方法： 制板 点样 展开 检视 硅胶薄层色谱法 * （一）制板 粘合剂：水或CMC-Na，用量1:3 厚度：0.3mm，制备时0.5mm 活化：自然晾干后，105℃烘1h 贮备：干燥器 * （1）样品溶液的