水果表面生防酵母的分离鉴定及其对猕猴桃采后病害的防治研究.pdfVIP

1绪论 水果表面生防酵母的分离鉴定及其对猕猴桃 采后病害的防治研究 摘 要 在猕猴桃贮藏期间青霉病、灰霉病和黑斑病是主要的侵染性病害，会造成巨大的 腐烂损失。一直以来，对于果蔬病害的防治多使用的是化学杀菌剂，也是病害防治的 常见手段。但是由于农药残留对人体的危害、环境污染和以及病原菌产生抗药性等诸 多缺点，急需一种健康安全的保鲜方法来取代化学杀菌剂的使用。生防酵母菌是一种 新的防治手段，其产生的附属产品是对于人体没有伤害，并且对病原菌还具有拮抗作 用，能有效的抑制病原菌的生长，是一种对果蔬采后病害防治的新途径。 本研究针对于分离、筛选出能够抑制果实采后病害的拮抗菌株，鉴定其生物学特 性，并测定所筛选出的菌株李1 （李子果皮分离），葡1 （葡萄果皮分离）和山2 （山 竹果皮分离）对青霉病、灰霉病和黑斑病的抑制效果，以及在果实伤口的繁殖情况， 并对其防治机理进行初步探讨。主要结果如下： 1、拮抗菌的分离和筛选：用无菌水分离的方法从不同水果表面分离出拮抗酵母 菌，再用稀释平板法，对分离出的酵母菌进行纯化。结果筛选出对青霉菌（Penicillium expansum）具有明显抑制效果的27株酵母菌。 2、拮抗菌的鉴定：先根据酵母菌的形态特征进行初步区分，进而采用ITS序列 的鉴定，通过同源性比对及系统发育分析，鉴定拮抗菌李1为果假丝酵母菌（Candida fructus）、葡1为特立科拉毕赤酵母菌 (Pichia terricola)、山2为仙人掌有孢汉逊酵母 （Hanseniasporaopuntiae） Candida 菌 。猕1 （猕猴桃果皮分离）为雷氏假丝酵母 （ railenensis）、猕2（猕猴桃果皮分离）为地霉属酵母样真菌（Galactomycesgeotrichum）、 猕3 （猕猴桃果皮分离）为汉森酵母 （Hanseniasporameyeri）。 3、拮抗菌的抑菌试验：将浓度为1x107CFU/mL 的拮抗酵母菌李1、葡1和山2 接种到红阳猕猴桃上，放置于25℃培养箱中，李1、葡1和山2对青霉菌有着显著的 抑制效果，发病率分别为43.33%、40%、30%，对照组无菌水和青霉菌发病率100%。 李1、葡 1和山2对灰霉菌 （Botrytis cinerea）有着显著的抑制效果，发病率分别为 30%、23.33%、30%，对照组无菌水和灰霉菌发病率100%。李1、葡1和山2对链格孢 菌 （Alternariaalternata）有着显著的抑制效果，分别发病率为6.67%、6.67%、10%， 对照组无菌水和链格孢菌发病率100 %。将浓度为1x107 CFU/mL 的拮抗酵母菌猕1、 1 1绪论 猕2和猕3接种于智利猕猴桃上，放置于25℃培养箱中，对于青霉菌、灰霉菌和链 格孢菌有着明显的抑制效果，其发病率分别为80%、80%、86.67%，53.33%、56.67%、 7 60%，16.67%、30%、26.67%。将浓度为1x10 CFU/mL 的拮抗酵母菌李1、葡1和山2 接种到青苹果上放置于25℃培养箱中，对于青霉菌、灰霉菌和链格孢菌有着明显的 抑制效果，其发病率分别为20%、10%、10%，6.67%、10%、10%，10%、6.67%、10%。 对照组无菌水和病菌发病率均为100%。 4、拮抗菌的种群数量生长速度：拮抗酵母菌李1、葡1和山2在有无青霉菌、 灰霉菌和链格孢霉菌作用的情况下都能够在果实伤口迅速生长繁殖。接种在红阳猕猴 桃上的酵母菌在第一天的时间里迅速繁殖，在之后的时间段里趋于较为稳定。 7 5、用 1×10 CFU/mL 的酵母菌李1、葡1和山2接种于红阳猕猴桃中，按0h、 h h h h h CAT SOD 12 、24 、48 、72 、96 分别提取出