基因新项目工程期中作业.docVIP

第一章 基因工程概论 什么是基因工程？ 在体外对不一样生物遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表示出基因产物。 基因工程诞生三个理论基础是什么？ 1 . DNA是遗传物质 DNA双螺旋结构 3. 中心法则和遗传密码 基因工程诞生六个技术突破？ 限制性内切酶（restriction enzymes） DNA连接酶（ligase） 载体（vector） 感受态体系 琼脂糖凝胶电泳 6. DNA测序技术 基因工程诞生标志？ Berg开创性试验 2. Boyer-Cohen试验 基因工程关键操作内容包含哪些？ 目标基因获取 从复杂生物基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等步骤，分离出带有目标基因DNA片断。 重组体制备 将目标基因DNA片断插入到能自我复制并带有选择性标识（抗菌素抗性）载体分子上。 重组体转化 将重组体（载体）转入合适受体细胞中。 4克隆判定 挑选转化成功细胞克隆（含有目标基因）。 5.目标基因表示 　　使导入寄主细胞目标基因表示出我们所需要基因产物。 基因工程存在哪些安全隐患？ 对环境影响 　　重新组合一个在自然见还未发觉生物性状有可能给现有生态环境带来不良影响。 新型病毒出现 　　制造带有抗生素抗性基因或有产生病毒能力基因新型微生物有可能在人类或其它生物体内传输。 癌症扩散 　　将肿瘤病毒或其它动物病毒DNA引入细菌有可能扩大癌症发生范围。 人造生物扩散 新组成重组DNA生物体意外扩散可能会出现不一样程度潜在危险。 ７.叙述：基因工程应用有哪些？ 一、基因工程在农业生产中应用 1. 提升植物光合作用效率 （1）提升CO2固定率 　　改变和光合作用相关酶结构和组成（如二磷酸核酮糖羧化酶）。 提升光能吸收率和转化率 　　改变光能交换系统分子基因结构。 提升豆科植物固氮效率 　　使非固氮植物转变为固氮植物或能和根瘤菌共生固氮。 转基因植物 　　是农业生物技术关键内容。 　　是将克隆到特殊基因导入受体植物，使之增加部分优质性状（高产、稳定、优质、抗虫、抗病等）。 转基因动物 　　将外源基因导入动物细胞，并在基因组内稳定整合，遗传给后代。 　　使动物成为生物反应器生产有用活性蛋白等。 基因工程在工业中应用 纤维素开发利用 　　克隆多种参与纤维素降解酶基因，导入酿酒酵母，就可能利用廉价纤维素来生产葡萄糖，发酵成酒。 酿酒工业 　　用外源基因改造酿酒酵母，产生优质啤酒。或用酿酒酵母生产蛋白质等。 三、基因工程在医药上应用 1. 用转基因植物或动物生产药品 2. 用微生物生产药品 　　大肠杆菌或酵母菌生产激素（如胰岛素）、干扰素等 技术设计高效高特异性生物制剂 　　应用定点突变技术设计蛋白质或酶结构，制造出高效高特异性生物制剂 研制疫苗 　　制造新型疫苗（如HIV、乙肝、丙肝、霍乱、痢疾、SARS） 5. 基因诊疗 6. 法医判定 7..基因诊疗 将正常外源基因导入靶细胞中以填补靶细胞所缺失或突变基因、或抑制异常表示基因。 四、基因工程在环境保护中应用 1. 检测水污染 用重组细菌或转基因鱼等检测水污染 生物降解 用带有重组质粒“超级菌”分解油（烷烃类）、有机农药污染。 第二章 基因工程酶学基础 限制性核酸内切酶概念及其功效 限制性核酸内切酶：是一类能够识别双链DNA分子中某种特定核苷酸序列（4—8bp），并由此处切割DNA双链核酸内切酶。 功效：自我保护作用。 （1）限制（Restriction） 限制性内切酶将侵入细菌体内外源DNA切成小片断。 （2）修饰（Modification） 细菌本身DNA碱基被甲基化酶甲基化修饰所保护，不能被本身限制性内切酶识别切割。 限制性内切酶命名标准 用属名第一个字母和种名头两个字母组成3个字母略语表示寄主菌物种名。 用一个右下标大写字母表示菌株或型。如Ecok, EcoR（现在全部写成平行，如EcoRI）。 假如一个特殊寄主菌内有多个不一样限制和修复系统，用罗马字母表示。如EcoR I，EcoR V。 限制酶前面要带上R（Restriction)， 修饰酶前面要带上M（Modification）。（现已省略）。 限制性内切酶有哪些类型？各有什么特点？ I 型限制性内切酶 （1）识别位点序列 未甲基化修饰特异序列。 EcoB： TGA(N)8TGCT EcoK：AAC(N)6GTGC 切割位点 在距离特异性识别位点约1000—1500 bp处随机切开一条单链。 II 类限制性内切酶 识别位点序列 未甲基化修饰双链DNA上特殊靶序列（多数是回文序列）。 和DNA起源无关。 切割位点 切开双链DNA。形成粘性末端（sticky end）或平齐