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基因工程原理 第一章 序论 赵洲 赤峰学院生命科学系 一、课前引言： 二、基因和基因是是非非（P44）1、基因到底是什么； 2、转基因食品对人类健康影响； 3、转基因对生态环境影响； 4、人类基因组计划和后基因组时代； 5、基因武器 ； 、、、、等等 基因概念 1、从朴素认识到基因在理论、实践中应用 1865年 Mendel 提出 遗传因子学说 1869年 Friedrich Miescher分离出核酸 1879年 Walter Flemming发觉/描述染色体行为 19 重现Mendel遗传因子学说 19 Sutton、Boveri 提出遗传因子在染色体上 19 Johansen 提出基因gene ，genotype、phynotype 1928年 Fred Griffith 肺炎球菌转化试验 1941年 G.W. Beadle 、E.L. Tatum 一个基因一个酶学说 1944年 Avery 等经过多种试验证实DNA是遗传物质 1951年 Rosalind Franklin拍摄到了核酸X射线衍射照片 1953年 J.D. Watson 、F.H.C. Crick 双螺旋 1957年 Benzer 以T4噬菌体研究提出了顺反子学说 1961年 M.W. Nirenberg 等人搞清了三联体密码 1967年 M.W. Nirenberg 等破译了全部64个遗传密码 然后,沃森和克里克等人提出“中心法则” 1969年Jonathan Beckwith 分离出一个细菌基因 1970年Hamilton O. Smith发觉了限制性内切酶，对核苷酸排列次序研究及DNA重组技术研究提供了帮助 1972年Paul Berg发明出第一个重组DNA分子 1973年Herbert Boyer和Stanley Cohen发展了重组DNA技术，发觉改造后DNA分子可在外来细胞中复制 1978年美国开始借助基因技术用大肠杆菌批量生产人类胰岛素 1982年GeneBank数据库建立 2.基因概念完善： 三、基因工程概念（P43） 也叫基因操作、重组DNA技术、遗传工程； 是按着大家科研或生产需要，在分子水平上，用人工方法提取或合成不一样生物遗传物质（DNA片段），在体外切割，拼接形成重组DNA,然后将重组DNA和载体遗传物质重新组合，再将其引入到没有该DNA受体（病毒、质粒或其它载体分子）细胞中，进行复制和表示，生产出符合人类需要产品或发明出生物新性状，并使之稳定地遗传给下一代。 四、关键内容： 1、基因工程工具； 2、基因工程载体； 3、基因工程技术； 4、基因工程操作过程； 5、工程生物筛选、判定； 6、基因工程相关问题； 五、 基因工程发展（P47） 基因工程准备阶段 1、理论基础： 在40年代确定了遗传信息携带者，即基因分子载体是DNA而不是蛋白质，从而明确了遗传物质基础问题。 在50年代揭示了DNA分子双螺旋模型和半保留复制机理，处理了基因自我复制和传输问题。 在50年代末期和60年代，相继提出了“中心法则”和操纵子学说，并成功破译了遗传密码，从而说明了信息流向和表示问题 2、技术基础 20世纪60年代末70年代初，限制性内切酶和DNA连接酶等发觉，使DNA分子进行体外切割和连接成为可能。 70年代中期，DNA分子核苷酸序列分析技术问世。 这两项技术，使DNA结构分析问题得到了根本处理。 1972年首次构建了一个重组DNA分子，并提出了体外重组DNA分子进入宿主细胞过程，和在其中进行复制和有效表示等问题。 在60年代还发展出了琼脂糖凝胶电泳和Southern转移杂交技术，这对于DNA片断分离、检测十分有用，并很快被应用于基因操作试验。 基因工程问世 1973年Cohen等首次完成了重组质粒DNA对大肠杆菌转化，同时和S.Boyer合作，将非洲爪蟾含核糖体基因DNA片段和质粒pSC101重组，转化大肠杆菌，转录出对应mRNA 基因工程快速发展阶段 二十世纪八九十年代是基因工程基础研究趋向成熟； 二十一世纪初将是基因工程应用研究鼎盛时期 六、基因工程研究关键内容或步骤 从复杂生物有机体基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等步骤，分离出带有目标基因DNA片段； 在体外，将带有目标基因外源DNA片段连接到能够自我复制并含有选择记号载体分子上，形成重组DNA分子； 将重组DNA分子转移到合适受体细胞（寄主细胞），并和之一起增殖； 从大量细胞繁殖群体中，筛选出取得了细胞重组DNA分子受体细胞克隆； 从这些筛选出来受体细胞克隆，提取出已经得到扩增目标基因，供深入分析研究使用； 将目标基因克隆到表示载体上，