基因新项目工程样本.docVIP

第一章 基因工程基础知识 1.1基因工程概念 狭义基因工程仅指用体外重组DNA技术去取得新重组基因；广义基因工程则指按大家意愿设计，经过改造基因或基因组而改变生物遗传特征。 简单地讲，基因工程就是改造基因。 1.2多个基础概念 生物工程（biological engineering）：应用生命科学及工程学原理，借助生物体作为反应器或用生物成份作工具以提供产品来为社会服务生物技术。 基因工程（genetic engineering）：将在体外进行修饰、改造脱氧核糖核酸分子导入受体细胞中进行复制和表示技术。 遗传工程：用人工手段把一个生物遗传物质转移到另一个生物细胞中去，并使这种遗传物质所带遗传信息在受体细胞中表示技术。 DNA重组：发生在DNA分子内或分子间遗传信息重新共价组合过程。 杂交育种：通常指远缘杂交，或两个遗传上不相关个体间进行繁殖后代行为。 蛋白质工程（protein engineering）：在基因工程基础上，结合蛋白质结晶学，计算机辅助设计和蛋白质化学等多学科基础知识经过对基因人工定向改造等手段，对蛋白质进行修饰，改造和拼接以生产出能满足人类需要新型蛋白质技术。 发酵工程：采取现代工程技术手段，利用微生物一些特定功效，为人类生产有用产品，或直接把微生物应用于工业生产过程一个新技术。 1.3 DNA重组和核酸杂交 DNA重组（DNA recombination）指DNA分子内或分子间发生遗传信息重新共价组合过程。包含同源重组、特异位点重组和转座重组等类型，广泛存在于各类生物。体外经过人工DNA重组可取得重组体DNA，是基因工程中关键步骤。 核酸杂交（ Hybridization）：　互补核苷酸序列（DNA和DNA、DNA和RNA、RNA和RNA等）经过Watson-Crick碱基配对形成非共价键，从而形成稳定同源或异源双链分子过程，称核酸杂交。 二者最大不一样是：核酸杂交是整条核酸链重组，而DNA重组还包含核酸片段重组。DNA重组技术是基因工程前提和关键。 第二章 基因工程原理 2.1基因改造可能性 DNA同源重组（自然重组）:在生物细胞中自发进行，需要大量酶类。 DNA体外重组 优点：微生物操作简单、易分析、成本低。 方法：从头合成 模拟生物细胞中DNA剪切和连接作用，利用生物酶类在体外进行DNA重组工作。 2.2以限制酶作用为基础基因工程原理 DNA限制性内切酶是指生物体内能识别并切割特异双链DNA序列一个内切核酸酶。它能够将外来DNA切断酶，即能够限制异源DNA侵入并使之失去活力，但对自己DNA却无损害作用，这么能够保护细胞原有遗传信息。因为这种切割作用是在DNA分子内部进行，故名限制性内切酶(简称限制酶)。 30多年前，当大家在对噬菌体宿主特异性限制-修饰现象进行研究时，首次发觉了限制性内切酶。细菌能够抵御新病毒入侵，而这种限制病毒生存措施则可归功于细胞内部可摧毁外源DNA限制性内切酶。首批被发觉限制性内切酶包含起源于大肠杆菌EcoR I和EcoR II，和起源于Haemophilus influenzaeHind II和Hind III。这些酶可在特定位点切开DNA，产生可体外连接基因片段。研究者很快发觉内切酶是研究基因组成、功效及表示很有用工具。当限制性内切酶应用在上世纪七十年代流传开来时候，以NEB为代表很多企业开始寻求更多限制性内切酶。除了一些病毒以外，限制性内切酶只在原核生物中被发觉。大家正在从数以千计细菌及古细菌中寻求新限制性内切酶。而对已测序原核基因组数据分析表明，限制性内切酶在原核生物中普遍存在--全部自由生存细菌和古细菌似乎全部能编码限制性内切酶。 依据酶亚单位组成、识别序列种类和是否需要辅助因子，限制和修饰系统最少可分为四类： Ⅰ 型（type Ⅰ）限制和修饰系统种类极少，只占 1% ，如 EcoK 和 EcoB 。其限制酶和甲基化酶 （即 R 亚基和 M 亚基） 各作为一个亚基存在于酶分子中，另外还有负责识别 DNA 序列 S 亚基，分别由 hsdR 、hsdM 和 hsdS 基因编码，属于同一操纵子（转录单位）。EcoK 编码基因结构为 R2M2S 。 EcoB 编码基因结构为 R2M4S2 。 Ⅱ 型（type Ⅱ）限制和修饰系统所占百分比最大，达 93%。Ⅱ 型酶相对来说最简单，它们识别回文对称序列，在回文序列内部或周围切割 DNA ，产生带 3- 羟基和 5- 磷酸基团 DNA 产物，需 Mg2+ 存在才能发挥活性，对应修饰酶只需 SAM 。识别序列关键为 4-6bp，或更长且呈二重对称特殊序列，但有少数酶识别更长序列或简并序列，切割位置因酶而异，有些是隔开。 Ⅱs 型（type Ⅱs）限制和修饰系统，占 5%，和 Ⅱ 型含有相同辅因子要求，但识别位点是非对称，也是非间