周辉 胚胎移植移植技术 教研.docVIP

PAGE PAGE 2 胚胎移植与体外受精技术 鸡西实验中学生物教研组 周辉 2010.04.08 胚胎移植 胚胎移植是将良种雌性动物配种后的早期胚胎取出，移植道同种的生理状态相同的其他雌性动物体内，使之继续发育成为新个体，所以也称作借腹怀胎。 胚胎移植有什么意义： ⑴ 可以充分发挥优良母畜的繁殖潜力，提高繁殖效率； 　　⑵ 可以加速品种改良，扩大良种畜群； ⑶ 可以控制疾病，克服不育； ⑷ 可以代替种畜引进； ⑸ 可以保存遗传资源； ⑹ 胚胎移植也是其他胚胎技术（胚胎分割、胚胎嵌性、别鉴定和核移植等）的基础 一、同期发情和超数排卵 （一）供体、受体的选择 畜牧学选择：胚胎移植的供体一般是需要加速繁殖的生产能力较高的优良品种，受体则是繁殖性能高的本地品种。 兽医学选择：主要任务是排除病畜，尤其是要把那些生殖器官患有疾病的个体清理出去。 （二）供体母畜的超数排卵　　 排卵率可以通过药物的方法进行控制。 应用外源性促性腺激素诱发卵巢多个卵泡发育， 并排出具有受精能力的卵子的方法， 称为超数排卵，简称“超排”。 大量研究证明，引起家畜超数排卵的物质是与生殖生理有关的激素或促激素，并且较深入了解了引起卵成熟和排卵的机理，使超数排卵技术广泛应用于家畜繁殖。 各种激素的作用：对卵巢产生作用并能引起卵的成熟和排卵的激素主要有：孕酮，雌二醇（E2），促卵泡激素（FSH）、促黄体激素（LH）、促性腺激素释放激素（GnRH）等。这些激素对卵巢的作用有相同之处，但也有差别。促黄体激素（LH）和孕酮的急剧增加是排卵的直接原因，排卵后剩下的卵泡细胞转变为黄体，并分泌孕酮，抑制其他卵泡的发育。 一般都采用促卵泡素（FSH）+前列腺素F2α(PGF2α)超排药物系列，也有人用孕马血清促性腺激素（PMSG）+PMSG搞血清+ PGF2α。 诱导家畜超数排卵，都需注射外源激素，其目的就是人工的使动物的激素水平达到阈值。从而诱发卵的成熟与排放。 超数排卵的方法采用不同激素组合的方法进来研究较多，其中诱导母牛超数排卵的试验归纳起来有：1）促卵泡素（FSH）＋其他激素：小剂量多次注射FSH，每天两次，3～4天，第3～5天注射前列腺素（PGF2α）以溶解黄体；2）孕马血清促性腺素（PMSG）＋其他激素：性周期的8～12天注射一次PMSG ，两天后注射PGF2α促使黄体溶解，后48hr，母牛发情排卵，效果好。 （三）供体、受体的同期发性 发情的同步化：进行胚胎移植，必须使供体与受体同步发情，也就是有相同的生殖周期。通常供、受体同时注射PGF2α，牛为0.4mg，羊为0.2mg。 哺乳动物的生殖周期是各式各样的，有的一年只有一次发情期，有一定的生殖季节。胚胎移植时受体与供体同步发情，处于相同的生殖生理状态，才可能使一个供体超数排卵获得的胚胎在多个受体子宫内受孕。家畜同步化发情是胚胎移植能否成功的关键之一。 受体母畜与供体同时注射PGF2α。 （四）供体的发性鉴定和配种 在正常情况下，供体大多数在超排处理结束后12~48h发性。发情鉴定主要是以接受爬跨且站立不支为主要判定标准，辅以直肠检查。一般在发情后8~12h第一次输精，以后每间隔8~12h输精一次，直到发性结束。 二、胚胎采集 （一）采集胚胎时间 以发情日为第零天，在第6~7.5天或第2~3天分别从子宫角或输卵管回收胚胎。 （二）胚胎采集方法 1.手术法采集方法 （1）输卵管冲胚 用注射器的磨钝针头刺入子宫角尖端，注入冲胚液，然后从输卵管的伞部接取冲胚液，这种方法适用于在排卵后4天以内进行。牛羊冲胚液用量为10ml即可。 （2）子宫冲胚 从子宫角的输卵管端注入冲胚液，由基部接取；也可以由子宫角基部液注入冲胚液，另一端接取。冲胚液用量依子宫角容积（母畜种类）大小而不同，羊一般为50~100ml. 2.非手术法采集胚胎 三、胚胎的检查及鉴定 并非所以的胚胎都用于移植，因为受精卵可能有：质量问题；发育不完全；采集时受损。显微镜下观察采集胚胎应该是：外观饱满、透明带完整、卵间隙小，卵裂球大小均匀，界限清晰，透亮。充实，胞质均匀等。 （一）捡卵 捡卵借助于实体显微镜进行。进口的特制集卵杯，上端连接在冲胚管的出口上，杯中筛也允许冲卵液流出，胚胎集中在杯底，直接在显微镜下捡卵，十分方便。 （二）胚胎质量的鉴定和分级 1.胚胎的鉴定 在20~40倍实体显微镜下观察受精卵的形态、色调、分裂球的大小、均匀度、细胞密度、与透明带的间隙以及变性情况等。 2.胚胎的分级 胚胎分A、B、C三个等级。 四、胚胎移植 （一）手术法移植 全身麻醉，手术将子宫和输卵管拉出，用钝形针在移植部位刺一个小孔，小心地将胚胎输入。牛、羊3日龄以前的胚胎（8细胞前）移植部位为输卵管，将输卵管由输卵管伞插入输卵管内一定深度，将胚胎