脂肪鉴定脂类细胞化学(苏丹Ⅲ染色法)实验报告（2020年-2021年）.pdfVIP

细胞生物学实验报告 脂类细胞化学（苏丹 Ⅲ染色法 ） 1. 实验目的：用苏丹 Ⅲ染液对小鼠的肠系膜细胞染色，观察细胞颜色，掌握 苏丹 Ⅲ染液的 染色方法。 2. 实验用品： （1） 仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴 管 （2 ） 实验药品：蒸馏水、甲醛钙溶液、 70%乙醇水溶液、苏丹 Ⅲ染液 （3） 实验材料：小鼠 3. 实验原理： （1） 由脂肪酸和醇作用生成的酯及其衍生物统称为脂类， 这是一类一般不溶于水而 溶于脂溶性溶剂的化合物。脂类是机体内的一类有机大分子物质，它包括范围 很广，大体上可以分为类脂和油脂两大类。类脂包括磷脂 (phospholipids) ， 糖脂 (glycolipid) 和胆固醇及其酯 (cholesterol and cholesterol ester) 三 类。而油脂可以分为常温下常温液态的油和常温下固态的脂肪两类。这几种 脂类化学结构有很大差异，生理功能各不相同。其共同物理性质是不溶于水 而溶于有机溶剂，在水中可相互聚集形成内部疏水的聚集体。 （2 ） 在固定细胞时，通常使用脂溶性固定液。然而，鉴定的材料是脂肪时， 脂溶性的固定液会溶解脂肪，致使把切片放到显微镜下观察时，观察不到被 染色的脂肪，只能看到脂肪细胞中有很大的空洞。最好的固定材料是甲醛类 的固定液。如医学上保存尸体采用的是福尔马林，即 40%的甲醛水溶液，本次 实验采用的则是甲醛钙溶液。 （3 ） 光学显微镜的切片多是石蜡切片。在熔接石蜡时，需要用到脂溶性溶剂， 而脂溶性溶剂会溶解细胞中的脂肪，因此本次实验不可采用石蜡切片。但是 锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等有机溶剂，可以采用石蜡切片。 （4 ） 制作切片有多种方法， 如冰冻切片、 明胶包埋冰冻切片、 本次实验采用的是操 作简单的铺片法。 （5 ） 脂类染色的原理是， 染料溶于脂类显色。 选择溶剂时应注意， 溶剂必须既溶解 的染料，又不溶解掉脂类。 4. 实验步骤： （1） 用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。剪开腹腔，用镊子提起小肠，使盖玻 片紧贴于肠系膜。用剪子将连同盖玻片和其上粘的肠系膜剪下，反扣于已 滴加甲醛钙的载玻片上，固定 15 分钟 , 吸蒸馏水滴于载玻片、载玻片之间冲洗，用滴管不断吸取液体以去除固定 液。 （2 ） 用 70%的乙醇水溶液代替蒸馏水重复上一步骤，进行冲洗。 （3） 用苏丹 Ⅲ染液染色 30mins 。 （4 ） 染色结束时，用吸水纸吸去多余染液。擦净盖玻片周边及表面，用显微镜 观察。 5. 实验结果：脂肪细胞被苏丹 Ⅲ染液染成橘红色。细胞周围有溢出的脂肪粒，呈圆形，橘 红色。 10*4 显微镜下观察： 10*10 显微镜下观察： 10*40 显微镜下观察： 6. 分析与讨论 （1） 结果分析：脂肪细胞中含有大量脂肪，脂肪被苏丹 Ⅲ染液染成橘红色，因 而使整个细胞呈现橘红色。某些脂肪细胞破裂，而使脂肪溢出，呈橘红色 的圆球状。 （2 ） 注意事项 ① 在用盖玻片贴肠系膜：由于小鼠的肠系膜很小，因而应该提前缩小盖玻片的尺