生物专题DNA和蛋白质技术导学案(高三复习).docVIP

学习好资料 欢迎下载 课题：生物选修 1 专题 5DNA和蛋白质技术导学案 【知识梳理】 （一） DNA的粗提取与鉴定 实验原理 提取生物大分子的基本思路是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。对于 DNA的粗提取而言，就是要利用＿＿＿＿与＿＿＿＿ 、＿＿＿＿＿＿＿等在物理和化学性质方面的差异， 提取 DNA，去除其他成分。 （ 1） DNA的溶解性 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的＿＿＿＿＿溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使＿＿＿＿充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。 ② DNA不溶于＿＿＿＿＿＿溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将 DNA与蛋 白质进一步的分离。 （ 2） DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 o 在＿＿＿＿＿＿才会变性。洗涤剂能够瓦解＿＿＿＿，但对 DNA没有影响。 （ 3） DNA的鉴定 在＿＿＿＿条件下， DNA遇＿＿＿会被染成＿＿色，因此二苯胺可以作为鉴定 DNA的试剂。 2. 实验设计 1）实验材料的选取 凡是含有＿＿＿＿＿＿的生物材料都可以考虑，但是使用＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的生物组织，成功的可能性更大。 2）破碎细胞，获取含 DNA的滤液 破碎动物细胞： 如在鸡血细胞液中加入一定量的＿＿＿＿， 同时用＿＿＿＿＿搅拌， 过滤后收集滤液即可。 破碎植物细胞（如洋葱），需在切碎的洋葱中加入一定的＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿，进行充分的搅拌和研 磨，过滤后收集研磨液。 ①加入蒸馏水作用：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种＿＿＿＿液体，使血细胞＿＿＿＿＿，再加上搅拌的 机械作用，加速了鸡血细胞的破裂 ( 细胞膜和核膜的破裂 ) ，从而释放出 DNA。 ②加入洗涤剂的作用是：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解＿＿＿＿＿，有利于＿＿＿＿的释放；加入食 盐的作用是：溶解＿＿＿＿＿。 ③如果研磨不充分， 会使细胞核内的＿＿＿＿＿释放不完全， 提取的 DNA量变＿＿＿＿＿， 影响实验结果， 导致看不到＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿、用二苯胺鉴定不显示＿＿＿＿等。 （ 3）去除滤液中的杂质 ①方案一：利用 DNA在不同浓度 NaCl 溶液中＿＿＿＿不同，通过控制＿＿＿＿＿＿＿＿去除杂质。 ②方案二：根据酶的专一性，利用木瓜蛋白酶分解＿＿＿＿＿＿，而不分解＿＿＿＿＿＿； ③方案三：利用 DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使＿＿＿＿变性，与＿＿＿分离。 （ 4） DNA的析出与鉴定 ① DNA的析出：将处理后的溶液过滤 ，加入与滤液体积相等、冷却的＿＿＿＿＿＿＿＿，静置 2～ 3min，溶 液中会出现＿＿＿＿＿＿＿＿，这就是粗提取的 DNA。 DNA的鉴定 : 将白色丝状物用＿＿＿＿＿的NaCl 溶液再溶解，加入 4ml 的＿＿＿＿＿，混合均匀后，在 ＿＿＿＿＿＿条件下，溶液被染成＿＿＿＿色。 学习好资料 欢迎下载 注意事项 1）以血液为实验材料时，需要加入柠檬酸钠防止＿＿＿＿＿＿＿＿ 2）要提取洋葱等的 DNA时，加入洗涤剂后，动作要＿＿＿＿＿＿＿＿，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作。 （ 3）加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要＿＿＿＿＿＿，以免＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，导致 DNA分子不 能形成絮状沉淀。 （ 4）二苯胺试剂要＿＿＿＿＿＿＿＿，否则会影响鉴定的效果。 （ 5）当 NaCl 溶液浓度低于 0.14mol/L 时，随浓度的升高， DNA的溶解度＿＿＿＿＿＿＿；当 NaCl 溶液浓 度高于 0.14mol/L 时，随浓度升高， DNA的溶解度＿＿＿＿＿＿＿＿。 （二）多聚酶链式反应扩增 DNA片断 1. PCR原 条件 组分 作用 理 （1）细 模板 胞内 DNA 复制条件分 析： 原料 酶 能量 引物 （ 2 ） 细 胞内 DNA复制过程的解 析： ①＿＿＿＿＿＿＿：解旋酶、 ATP， DNA两条链打开，形成两条 DNA单链。 ②＿＿＿＿＿＿＿：在 DNA单链 3’端与 DNA反向配对结合。 ③＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿： DNA聚合酶与模板链结合，标志着单链合成开始。 ④＿＿＿＿＿＿＿： DNA聚合酶从引物 3’端开始，将配对的脱氧核苷酸连接起来。 （ 3） DNA分子复制的人工控制 在 DNA的复制过程中，复制的前提是＿＿＿＿＿＿＿。在体外可通过控制＿＿＿＿来实现。 ①解开螺旋：在＿＿＿＿＿℃范围内，DNA双螺旋打开，形成两条 DNA单链，称为＿＿＿。 ②恢复螺旋：在＿＿＿℃左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为＿＿＿＿。 ③复制条件：＿＿＿＿＿（相当细胞内的核基质）；＿＿＿＿＿模板；分别与两条模板链相结合的＿＿＿＿ ＿＿＿＿；四种脱氧核苷酸；＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿酶 ④反