发酵工程06发酵工程单元操作.pptVIP

? τ =(2.303/k)log(No/Ns) τ --- 灭菌时间（秒） k--- 反应速度常数，与菌的种类和加热温度有关（ s －１ ） No--- 灭菌开始时，污染的培养基中杂菌个数（个／ ml ） Ns--- 经过灭菌时间 T 后，残存活菌个数（个／ ml ） （二）灭菌温度与菌反应速度 常数的关系 ? 灭菌温度与菌死亡反应速度常数的关系： ? k=Ae-E/RT ? K —— 菌死亡的速度常数（ 1 ／秒），当反应物的浓度为单 位浓度时，则反应速度常数在数值上等于反应速度 A —— 阿累尼乌斯常数（ 1 ／秒） R —— 气体常数（ 1.987*4.817 焦／开／摩尔） T —— 绝对温度（开） 二、影响培养基灭菌的因素 ? 1 、 pH 值的影响 ? pH 值对微生物的耐热性影响很 大， pH 为 6.0-8.0 时微生物最 不易死亡， pH 6.0 时氢离子 易渗入微生物的细胞内。 ? 2 、培养基成分 ? 培养基的成分中，油脂、糖类、蛋白质 都是传热的不良介质，会增加微生物的 耐热性，使灭菌困难。 ? 浓度较高的培养基相对需要较高温度和 较长时间灭菌。 ? 高浓度的盐类，色素则削弱其耐热性， 故较易灭菌。 ? 3 、培养基中的颗粒物质 ? 培养基中的颗粒物质大，灭菌困难，反 之，灭菌容易。一般说来，含有颗粒对 培养基灭菌影响不大，但在培养基混有 较大颗粒，特别是存在凝结成团的胶体 时，会影响灭菌效果，必须过滤除去。 三、灭菌的实际操作 ? （一）空罐灭菌 ? 空罐灭菌也称空消。无论是种子罐、发酵罐、 还是尿素（或液氨）罐、消泡罐，当培养基 （或物料）尚未进罐前对罐进行预先灭菌，为 空罐灭菌。 ? 为了杀死所有微生物特别是耐热的的芽孢，空 罐灭菌要求温度较高，灭菌时间较长，只有这 样才能杀死设备中各死角残存的杂菌或芽孢。 ? （二）实罐灭菌 ? 将培养基置于发酵罐中用蒸汽加热，达到预定 灭菌温度后，维持一定时间，再冷却到发酵温 度，然后接种发酵，这叫做实罐灭菌，又称分 批灭菌。 ? 操作要点： ? 三路进汽：直接蒸汽从通风、取样和出料口进 入罐内直接加热，直到所规定的温度，并维持 一定的时间。这就是所谓的“三路进气”。 培养基连消工艺流程图 ? （ 2 ）过滤除菌法 ? 是将液体或气体用微孔薄膜过滤，使大 于孔径的细菌等微生物颗粒阻留，从而 达到除菌目的。在体外培养时，过滤除 菌大多用于遇热容易变性而失效的试剂 或培养液。 ? 目前，大多实验室采用微孔滤膜滤器除菌。 关键步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。 ? 滤膜过滤装置、烧结玻璃滤板过滤器、石 棉板过滤器（ Seitz 滤器）、素烧瓷过滤器 以及硅藻土过滤器等。过滤除菌的缺点是 无法去除其中的病毒和噬菌体。 ? （ 3 ）其他方法 ? 在配制培养基时，为避免发生沉淀，一 般应按配方逐一加入各种成分。 ? 另外，加入 0.01 ％ EDTA 或 0.01 ％ NTA （氮川三乙酸）等螯合剂到培养基中， 可防止金属离子发生沉淀。 ? 最后，还可以用气体灭菌剂如氧化乙烯 等对个别成分进行灭菌处理。 三、化学杀菌剂或制菌剂 （一）表面消毒剂 ? 常用消毒剂的种类很多，它们的杀菌强度 各不相同。但几乎都有一个共同规律，即当其 在极低浓度时，常常会对微生物的生命活动起 刺激作用，随着浓度逐渐增高，就相继出现制 菌和杀菌作用，因而形成一个连续的作用谱。 ? 表面消毒剂是指对一切活细胞都有毒性，不能 用作活细胞内的化学治疗用的化学药剂。 ? 为比较各种表面消毒剂的相对杀菌强度，常采 用在临床上最早使用的消毒剂 —— 石炭酸作为 比较的标准，并提出了石炭酸系数这一指标。 ? 所谓石炭酸系数，指在一定时间内被试药剂能 杀死全部供试菌的最高稀释度与达到同效的石 炭酸的最高稀释度的比率。一般规定处理时间 为 10 分钟，而供试菌定为 Salmonellatyphi （伤 寒沙门氏菌）。 消 毒 试 验 ? ⑴ 以人工染菌实物为消毒对象，模拟现场表面 污染大肠杆菌液。 ? ⑵ 消毒前采样：放置无菌规格板，取无菌棉拭 于含 5ml 稀释液试管中沾湿， 在规格板空心处旋 转自左至右涂抹整个区域 ? ⑶ 消毒后采样：在前采样地点旁用 0.05 ％过氧 乙酸溶液消毒物体表面， 30 分钟后将无菌棉 拭 于含 5ml 采样液试管中沾湿，作为消毒后样液。 ? ⑷ 将 消 毒 前 后 样 液 充 分 振 荡 摇 匀 后 稀 释 ⑸ 培养待凝固后 37 ℃培养 24 ～ 48 小时，作菌落 计数。 第六章 发酵工程基本操作 ? 第一节 严格消毒灭菌 ? 第二节 氧的供给 ? 第三节 空气除菌 第一节 严格消毒灭菌 ? 控制有害微生物主要有以下几种措施 （一）灭菌（ sterilization ） ?