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第二十二章
免疫学检测技术的基本原理
测分够异性抗体的B测T胞产生的瓶胞因子
a+kx→A?|
加人巴细胞
间接凝集反
OOAAO YYYYYyy
入酶标记教杭体面人梅标记杭细胞因子抗体
敬体粒可溶性抗原致敏罰粒抗体
Aa
分+
0000|0
人底物是色
中待
溶性抗原抗体球敏粒
集捍制
YYYYYYYYY
凝集反应
火免疫
图18-1酶联免疲理点试验( ELISPOt)示意图
教学大纲
掌握
体外抗原抗体结合反应的特点及影响因素;
抗原抗体体外反应的类型。
熟悉
抗原抗体反应的检测方法;
免疫细胞的分离技术;
免疫细胞功能的测定。
了解
免疫学检测方法的应用。
第一节体外抗原抗体结合反应的特点及影响因素
、抗原-抗体反应的特点及检测原则
特点:
1.高度特异性
2表面化学基团之间的可逆结合
3适宜的抗原抗体浓度和比例
4.抗原抗体反应的两个阶段
1)抗原抗体特异性结合阶段
2)可见反应阶段
抗原一抗体反应的特点
1、高度特异性:
抗原表位与抗体分子CDR的互补结合是抗原-抗
体反应的化学本质。
2、表面化学基团的可逆性
抗原与相应抗体除空间构型具有互补性外,
两者主要是通过分子表面的氢键、疏水键、静
电和范德华力非共价结合。
亲合力( avidity):
指抗体分子的抗原结合部位与抗原表位之间
的结合强度
3、适宜的抗原抗体浓度和比例
在一定浓度范围内,二者比例合适,可出
现肉眼可见的反应物;
若比例不合适,即抗原或抗体过剩时,可
形成小分子抗原-抗体复合物。此种小分子复
合物多呈游离状态,不能为肉眼所见。
4、抗原-抗体反应的两个阶段
①抗原-抗体特异性结合阶段:
特点:反应快,数秒钟至几分钟内完成
②反应可见阶段:
特点:所需时间较长,从数分钟、数小时到
数日不等,且受电解质、温度和酸碱度等因
素影响。
二、抗原-抗体反应的影响因素
1.电解质:
在电解质作用下,抗原-抗体复合物失
去较多负电荷,使彼此连接出现肉眼可见的
凝集或沉淀现象。
试验中常用085%的NaC溶液作为
稀释液,提供适当浓度的电解质。
2.温度
提高浓度可增加抗原与抗体分子碰撞机会,
加速抗原-抗体复合物的形成。
通常抗原-抗体反应的最适温度是37℃。
3.酸碱度
抗原-抗体反应的最适pH值在6-8之间。
pH过高或过低,均可影响抗原或抗体的理化性
状,影响试验的可靠性。
三、抗原-抗体反应类型和检测方法
根据抗原的性质、参与反应的成分和反应呈现的结果,
将抗原抗体反应分为四类
凝集反应
2沉淀反应
3免疫标记技术
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