《医学分子生物学》课件：常用分子生物学技术的原理及其应用.pptVIP

（二）酵母双杂交技术的基本原理和用途 本技术的建立是基于对酵母转录激活因子GAL4分子的认识。 GAL4分子有DNA识别区（BD）和促进转录的活性区（AD），这两个区域如果被分开将失去对下游基因表达的激活作用，但如果分开后的BD和AD又分别融合了具有配对相互作用的两种蛋白质分子后，就可以依靠所融合的蛋白质分子之间的相互作用而恢复对下游基因的表达激活作用。 （二）酵母双杂交技术的基本原理和用途 酵母双杂交系统的应用 证明两种已知基因序列的蛋白质可以相互作用的生物信息学推测。 分析已知存在相互作用的两种蛋白质分子的的相互作用功能结构域或关键的氨基酸残基。 将拟研究的蛋白质的编码基因与BD基因融合成为“诱饵”表达质粒，可以筛选AD基因融合的“猎物”基因表达文库，筛选未知的相互作用蛋白质。 酵母细胞作为宿主细胞的优点： 1、易于转化，便于回收扩增质粒。 2、具有可直接进行选择的标记基因和特征性报告基因。 3、酵母的内源性蛋白不易同来源于哺乳动物的蛋白结合。 电泳迁移率变动测定(electrophoretic mobility shift assay，EMSA)或称凝胶迁移变动实验(gel shift assay)最初用于研究DNA结合蛋白与相应DNA序列间的相互作用，可用于定性和定量分析，已经成为转录因子研究的经典方法。目前这一技术也被用于研究RNA结合蛋白和