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2.微量移液器的使用 将微量移液器按钮轻轻压在第一挡 垂直握持微量移液器，使吸头浸入页面下几毫米，千万别将吸头直接插到液体底部 缓慢、平稳地松开控制按钮，吸上样品液。否则液体进入吸头太快，导致液体倒吸入移液枪内部，或吸入体积减少。 等1s后将吸头提高液面，并使吸头在容器壁擦过 平稳把按钮压到第一停点，在把按钮压到第二停点以排出剩余液体、 提起微量移液器，使吸头在容器壁擦过 然后按吸头弹射器除去吸头 ⑴使用操作 生物化学资料网 0.0 * ⑵使用注意事项 未装吸头的微量移液器绝对不可用来吸取任何液体。 一定要再允许范围内设定容量，千万不要将读数的调节超出其适用的刻度范围，否则会造成损坏。 不要横放带有残留液体吸头的移液器 不要用大量程的移液器移取小体积样品 微量移液器每日用完后，应旋转到最大刻度，让弹簧恢复原形，保持弹性。 为了确保微量移液器的准确性，移液器必须定期进行校准。 生物化学资料网 0.0 * 3. 琼脂糖凝胶制作 选择好胶盒、胶板和梳子，洗净，把胶板放入胶盒中，梳子插上。 量取25ml 1×TBE溶液放入锥形瓶或烧杯中 称量0.25g 琼脂糖，倒入锥形瓶中 将锥形瓶放入微波炉中，让溶液沸腾2-3次，琼脂糖彻底融化 锥形瓶取出，稍稍冷却后倒入胶盒中 等待琼脂糖冷却凝固形成点样孔后即可 0.0 * 掌握酚氯仿法提取ＤＮＡ的原理和操作。 一、实验目的 实验二　基因组总ＤＮＡ提取 0.0 * 生物的大部分或几乎全部ＤＮＡ都集中在细胞核或类核中。DNA在体内通常都与蛋白质结合，蛋白质对DNA制品的污染常影响到以后的DNA操作过程，因此需把蛋白质除去，一般采用酚氯仿抽提法。苯酚、氯仿对蛋白质有极强的变性作用，而对DNA无影响。经苯酚、氯仿抽提后，蛋白质变性而被离心沉降到酚相与水相的界面，DNA则留在水相，少量的或与DNA紧密结合的蛋白质可用蛋白酶予以去除。DNA制品中少量的RNA无影响，必要时可加入不含DNase的RNase去除RNA污染。 二、实验原理 0.0 * 消化缓冲液: TE ?、EDTA、 NaCl、 SDS、蛋白酶K Tris平衡酚、氯仿:异戊醇(24:1)，NaAc，无水乙醇，70%乙醇 三、实验用具与试剂 微量移液器、高速离心机、1.5mlＥＰ管、吸头、烘箱、水浴锅、1.5ml管架、胶头滴管、冰箱 0.0 * １、切取组织 ，剪碎放入研钵(越细越好)，磨成粉末。以消化缓冲液处理55℃水浴过夜，获得组织消化液。 ２、取出消化组织液，5000rpm?，３min，取上清液于新离心管 。 ３、 加等体积Ｔris-平衡酚，轻轻混匀５min。 4、1000rpm，10min，留上清，取上清液于新离心管 。 ５、加等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提，轻轻混匀５min。 ６、同４。 ７、加等体积氯仿:异戊醇，轻轻混匀５min。 ８、同４。 四、实验步骤 0.0 * ９、加?1/10?体积3mol/L?NaAc，及２.５?倍体积预冷（－２０℃）无水乙醇，混匀。 －２０℃ 沉淀３０min。 １０、12000rpm，15min，弃上清。 １１、加70%乙醇1ml，混匀。 １２、 同１０。 １３、ＥＰ管放置于烘箱中烘干。 １４、加３０ul TE或ddH2O溶解ＤＮＡ。 １５、琼脂糖凝胶电泳检测。 0.0 * 　　　提取染色体ＤＮＡ的基本原理是什么？操作中应该注意什么？ 五、思考题 0.0 * １、学习ＰＣＲ扩增的基本原理。 ２、掌握ＰＣＲ技术的常规操作。 ３、了解ＰＣＲ扩增的参数设计。 一、实验目的 实验三　ＰＣＲ扩增 0.0 * １、聚合酶链反应 (Polymerase chain reaction，PCR)：利用核酸变、复性的性质，以待扩增的ＤＮＡ为模板，在体外由引物介导的酶促合成特异ＤＮＡ片段的过程。 ２、ＰＣＲ反应体系 　　引物、dNTP、 Mg２＋ 、模板、 Taq DNA聚合酶， Buffer。 二、实验原理 0.0 * ３、ＰＣＲ循环参数 ① 9５℃ 5min ② 9５℃ 30s ③ 5２℃ 30s ④ 72℃ 30s ⑤ goto② ２９times ⑥ 72℃ 10min 0.0 * Taq DNA聚合酶，PCR缓冲液， MgCl2，dNTP，引物，模板，ddH2O，TBE电泳缓冲液，EB,加样缓冲液 三、实验用具与试剂 旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，0.2ml PCR微量离心管，PCR仪，台式离心机，琼脂糖凝胶电泳系统，紫外凝胶成像系统 0.0 * １、在0.2ml PCR 微量离心管中配制30ul反应体系。 　　　 　dd water 　　　　　　　　20.5ul 10×PCR buf