illumina测序基础知识.docxVIP

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  • 2020-09-17 发布于江苏
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第一个要给大家讲的, 是它这个 flowcell 。Flowcell 翻成中文,就叫“流动池”。 我们来看这个图片。 图片当中,我们看到一个象载玻片大小的芯片。 这个芯片里 面,是做了 8 条通道。在这个通道的内表面,是做了专门的化学修饰。 它的化学 修饰,主要是用 2 种 DNA 引物,把它( 2 种 DNA 引物)种在玻璃表面。 这两种( DNA 引物的)序列是和接下来要测序的 DNA 文库的接头序列相互补 的。而且这 2 种引物是通过共价键,连到 Flowcell 上去。之所以要用共价键连 到 Flowcell 上去,是因为接下来有大量的液体要流过这个Flowcell ,只有有共 价键连接的这些 DNA ,才不会被冲掉。这就是 Flowcell 。 文库制作 再接下来,讲一下文库、和文库的制作(过程) 所谓的 DNA 文库,实际上是许多个 DNA 片段,在两头接上了特定的 DNA 接 头,型成的 DNA 混合物。 文库有 2 个特点,第 1 个特点,是当中这一段插入的 DNA ,它的序列是各种各 样的。第 2 个特点,它的两头的接头序列, 是已知的,而且是人工特地加上去的。 要做这个文库,首先是把基因组 DNA ,用超声波打断。然后打断之后,两头用 酶把它补平,再用 Klenow 酶在 3 ’端加上一个 A 碱基。然后,再用连接酶把这个接头给连上去。 连好了接头

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