细胞增殖-毒性实验步骤cck-8.docxVIP

细胞增殖 -毒性实验步骤 1、细胞传代、细胞计数、细胞增殖 -毒性实验步骤： 实验准备：用 75%酒精擦生物安全柜台面 2 遍，紫外线消毒 30 分钟（枪、枪头、 15ml 及 50ml 离心管、剪刀、封口膜、记号笔、打火机、酒精灯、培养瓶） ，复 温实验所需试剂 [细胞培养液（DMEM、1640）、磷酸缓冲盐溶液（ PBS）、胰酶（0.25% Trypsin-EDTA）、胎牛血清（ FBS）、双抗 ]，所有的试剂、仪器放入生物安全柜前要 用酒精喷洒消毒。显微镜下看细胞生长状态，有无污染。 1）倒去培养瓶内的培养液； 2）加入 PBS 2ml洗涤培养瓶内细胞 2 次； 3）加入胰酶 500ul/0.5ml 2～10min（具体时间因细胞而异， 可在显微镜下看是否贴壁，必要时轻拍培养瓶促使细胞脱落） ； 4）加入含 10%FBS的培养液 1～ 1.5ml[ 培养液：胰酶 =（2～3）:1] 中和胰酶； 5）轻轻吹打成单细胞悬液，吹打力度以不起气泡为宜； 6）将单细胞悬液吸入 10～ 15ml 离心管中，低速离心 800rpm 3 分钟，倒去上清 液； 7）加入含 10%FBS细胞培养液 1～2ml 吹打悬浮细胞至单细胞悬液； 8）吸取 20ul 细胞悬液（ 10ul 细胞悬液 +10ul 台盼兰液：给坏死细胞染色，判断细胞活力）至细胞计数板，进行 细胞计数 ； CCK-8实验：