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大鼠常规操作技术 孙 泉 首都医科大学实验动物部 010（办公室） sunquan@ccmu.edu.cn 1 ? 1. 了解动物实验的目的和意义 ? 2. 了解实验动物选择和染毒途径。 ? 3. 掌握大鼠实验的基本操作技术。 一、实验目的： 2 3 ? 1. 实验动物的选择 ? 2. 实验动物的抓取和固定 ? 3. 性别鉴定 ? 4. 实验动物编号标记 ? 5. 实验动物给药途径和方法 （灌胃、腹腔、皮下注射、尾静脉 注射） ? 6. 生物标本的采集 （鼠尾取血、心脏采血、眼眶取血） ? 7. 实验动物的处死 二 . 实验内容： 4 实验流程 5 大鼠的观察、抓取与固定 性别的判定、称重、标记编号及分组 大鼠灌胃操作（重点） 大鼠腹腔注射、尾静脉注、皮下注射 大鼠眼眶后静脉丛取血与断尾取血，以及大鼠的 处死 ? 动物物种选择基本原则： 动物的选择 6 ? 健康动物首先看外观： 体形丰满，被毛浓密有光泽、紧贴体表，眼睛 明亮，反应行动灵活。 ? 有无明显疾病症状 ? 体重、年龄 外观观察 7 动物的抓取和固定 ? 单手固定 ? 双手固定 ? 固定器 ? 固定板 ? 注意抓取动物的 手法 ? 抓取固定时力量 大小适宜 8 ? 未成熟鼠生殖器发 育不明显，肛门与 生殖器之间的距离 来区分。远 —— ♂、 近 —— ♀。 ? 成年鼠：雄性卧位 可见睾丸，雌性可 见腹部有 12 个乳头。 性别鉴定 9 ? 常用标记，两种染 料（苦味酸和中性 红或品红） ? 先左后右，先上后 下 动物的编号标记 10 ? 穿耳孔法 ? 左耳代表十位，右耳代 表个位 ? 应注意防止孔口愈合， 多使用消毒滑石粉涂抹 在打孔局部 11 ? 原则： 同一实验中，实验动物的年龄尽可能一致，实验动物 体重大致相近； 同组、同性别动物体重差异应小于平均体重的 10% ； 不同组间同性别动物体重均值差异小于 5% ；♀♂动物 各半，且♀♂实验结果分开统计、分析。 ? 称重 ? 编号 ? 随机分组 实验动物的分组 12 ? 经口染毒 （喂饲、 灌胃 、吞咽胶囊等） ? 经呼吸道染毒 （静式、动式和气管内注入） ? 经皮肤染毒 ? 注射染毒 （ 皮下、皮内、 肌内、 腹腔和鼠尾静脉注射 等） ? 其它 （直肠内、鼻腔等） 实验动物染毒途径和方法 13 灌胃 ? 抓取老鼠时应是鼠 成竖直线 ? 灌胃成功时，所 遇阻 力较小 ? 灌胃时 注意胃容量 ? 0.1ml/10g-0.3ml/10g ， ＜ 1mL 14 ? 腹下 1/3 外侧，避 免损伤实质器官 ? 30-45 °角刺入 ? 扎入时有“落空 感”，回抽无尿 液或血液 腹腔注射 15 ? 酒精擦拭尾部 ? 左手食指，拇 指配合按住尾 端 ? 右手持注射器 ，针尖轻轻抬 起与血管平行 刺入 ? 血管由红变白 ，按压止血 尾静脉注射 16 ? 俯卧固定，左手拇指和 食指捏住颈背部皮肤提 起，右手持针沿纵轴方 向刺入皮下，进针时感 觉有阻力，继续刺入， 突然阻力消失，活动针 头，确认刺入皮下即可 注射药液。 皮下注射 17 ? 俯卧保定，与皮肤平行 刺入捏住的皮肤，注射 部位局部形成皮丘。为 避免药液流出，停留片 刻，再将针头拨出 皮内注射 18 ? 血液采集 （ 断尾采血、眼眶采血 、心脏采血等） ? 尿液采集 ? 粪便采集 生物标本的采集 19 ? 固定 → 用手轻揉鼠尾 → 静脉充血后剪尾尖（ 1- 2mm ） → 用手从尾根向尾尖推挤 → 采血 → 干棉 止血。 每次 0.1mL 尾尖静脉采血法 20 ? 左手固定动物 → 滴少量 10% 可卡因于动物眼内 → 右手持消毒过毛细吸管 → 以抗凝剂湿润内壁 → 眼睑和眼球间旋转刺入 → 采血后消毒纱布止血 30 秒。 每次 0.2-0.3mL 眼眶后静脉丛采血 21 ? 动物仰卧 → 固定器固定 → 剪左侧心区毛 → 皮肤消毒 → 小号针头注射器在 3-4 肋间刺入。 可达 0.5mL 心脏采血法 22 ? 脊椎脱臼法：用左手按住动物的头部于实验台 上，右手抓住尾根部，快速、不间断地向后、 略向上使劲拉，使动物的颈椎以致脊椎脱臼死 亡。 ? 过量麻醉法 动物的处死 23