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吸收试验 放散试验 试 验 原 理 试 剂 操 作 步 骤 注 意 事 项 临 床 应 用 加热放散法 乙醚放散法 试 验 原 理 操 作 步 骤 注 意 事 项 临 床 应 用 试 验 原 理 操 作 步 骤 注 意 事 项 临 床 应 用 主要内容 1 吸收试验原理 待 检 红 细 胞 已知 效价 的抗 A 或 抗 B 血清 吸收液 已知抗原 的红细胞 滴定 比较吸收 前后血清中 抗体效价 红细胞上 有无相应 抗原及其 强度 间接判定待检 红细胞血型 及其亚型种类 2 试剂 ? 抗 A 及抗 B 分型血清。 ? 2%A 型及 B 型红细胞。 ? 受检红细胞。 3 操作步骤 1 、吸收液的制备： 取受检红细胞用生理盐水洗涤 3 次，末 次洗涤后将盐水倒尽，取压实红细胞 1 份，与等量抗 A 血清混合，另取 1 份与等 量抗 B 血清混合，置4℃冰箱至少 1 小时， 每 10 分钟摇动试管 1 次（红细胞充分吸 收抗体），离心后取上清液（即吸收 液）。 4 2 、倍量稀释： 排列 10mm × 60mm 小试管 4 排，每排 5 支， 每管各加生理盐水 0.2 ml 。第 1 、 3 两 排第 1 管分别加己吸的收抗 A 及抗 B 血 清 0.2 ml ；第 2 、 4 两排第 1 管分别加 未吸收的抗 A 及抗 B 血清 0.2 ml ；分别 作 2 ～ 32 的倍量稀释。 5 3 、第 1 、 2 两排每管各加 2%A 型红细胞 盐水悬液 0.2ml ，第 3 、 4 两排每管各加 2%B 型红细胞盐水悬液 0.2ml 。 4 、将试管振摇使红细胞充分混匀，置 室温 1 小时（或 1000rpm 离心 1min ）， 观察凝集反应。 6 结果判定 1 、吸收后，抗 A 效价较未吸收抗 A 效价 显著降低或消失者为 A 型（同理判定 B 型），若吸收后抗 A 和抗 B 都显著下降为 AB 型，若吸收后抗 A 和抗 B 效价都无显著 差异者为 O 型。 7 2 、若试验目的是鉴定 A 亚型， 则按受检 红细胞的吸收强度 ,A1A2A3AxAm 的规 律来判定。 B 亚型鉴定与此类似。 8 注意事项 1 、试验所用抗 A 及抗 B 血清效价不宜过 高，应先将抗血清效价稀释到 32 倍为宜。 若抗血清效价太高，抗血清被 A 亚型红 细胞吸收后效价下降不明显，难以判断 结果。 9 2 、红细胞经洗涤压实，盐水应尽量去 尽，以免抗血清被稀释。 3 、吸收试验的温度应根据抗原抗体反 应的最适温度来确定。 ABO 系统以4℃ 为宜， Rh 系统以37℃为宜。 10 临床应用 ? 本试验用以间接证明红细胞上血型抗 原及其强度，常用于 ABO 亚型鉴定、 全凝集或多凝集红细胞定型以及某种 原因引起红细胞血型抗原减弱时的定 型等。 11 放散试验 1 、 ABO 血型 IgM 类抗体常用热放散法。 2 、 Rh 血型 IgG 类抗体常用乙醚放散法。 12 热放散试验 实验原理 待检 红细胞 分 型血 清 物理条件 的改变 （加热） 抗体 待检 红细胞 试 剂 红细胞 确定抗体的 种类和强度 判定待检 红细胞上抗 原的型别 放散 凝集或 致敏 13 试剂 1 、 抗 A 和抗 B 分型血清。 2 、 2%A 型和 B 型试剂红细胞盐水悬液。 3 、受检红细胞。 14 操作步骤 1 、受检红细胞与抗 A 和抗 B 血清吸收见吸 收试验。 15 2 、离心去掉上清液，以 4 ° C 冷盐水洗 涤红细胞 3 ～ 4 次，倾去洗涤液，留取压 实红细胞。用 1/2 容积的生理盐水 , 置 56 ° C 水浴 10 分钟，每隔 15 秒振摇 1 次， 使吸附在红细胞上的抗体充分放散。 16 3 、立刻以 3000rpm 离心，离心式套管内 放温水，使温度尽量保持在 56 ℃ ，分离 得到的上清液即为放散液。 4 、将放散液用 2%A 型和 B 型试剂红细胞鉴 定抗体，即可检出受检红细胞的血型。 17 结果判定 ? 鉴定 A 亚型：用已知 A 亚型红细胞按放 散液抗体的强度 A1 ＜ A2 ＜ A3 ＜ Ax ＜ Am ， 判定受检红细胞 A 亚型的型别。 ? B 亚型的放散液鉴定方法相似。 18 1 、为了获得最大量的抗体，应加大吸收血 清量。 2 、放散时，应严格注意温度和时间。温度 过高红细胞易溶解；温度过低，抗体从红 细胞上放散不完全。 注意事项 19 3 、放散液中抗体易变性，故应立即进行鉴 定。若需保存，应将抗体放散于 AB 血清或 牛白蛋白溶液中。 20