实验二：淀粉酶活性测定实验报告.pdfVIP

淀粉酶活性的测定 一、实验目的 酶的活力是酶的重要参数，反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究 酶的基础。 酶活力由酶活力单位表征， 通过计算适宜条件下一定时间内一定量的 酶催化生成产物的量得到。 淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称。 α-淀粉酶是一种典型的内切型 淀粉酶 ,主要作用于淀粉水解的液化阶段 ,因此又叫液化酶。作为一种最重要的工 业酶制剂， α-淀粉酶广泛存在于动物 ,植物和微生物中。其中，微生物 α-淀粉酶 以其经济易得成为工业生产主要来源。目前 ,关于 α-淀粉酶活性的测定方法很多 种。 本实验采用杨氏改良法测定 α-淀粉酶；掌握测定 α-淀粉酶活性大小与温度 关系的方法，通过分析得出酶的最适温度范围。 二、实验原理 酶促反应中，反应速度达到最大值时的温度和 pH 值称为某种酶作用时的最 适温度和 pH 值。温度对酶反应的影响是双重的：一方面随着温度的增加，反应 速度也增加， 直至最大反应速度为止； 另一方面随着温度的不断升高， 而使酶逐 步变性从而使反应速度降低，其变化趋势呈钟形曲线变化。 不同菌株产生的酶在耐热性、 酶促反应的最适温度、 PH、对淀粉的水解程度， 以及产物的性质等均有差异。 α-淀粉酶属水解酶，作为生物催化剂可随机作用 于直链淀粉分子内部的 α-1,4 糖苷键，迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精 或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降， 淀粉与碘的反应逐渐消失， 这种作用称为液化 作用，生产上又称 α-淀粉酶为液化淀粉酶。 α-淀粉酶不能水解淀粉支链的 α-1,6 糖苷键，因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和 α-1,6 键的寡糖。 本实验通过淀粉遇碘显蓝色，淀粉含量越高，颜色越深。用分管光度计检测 显色效应大小，通过分管光度值计算酶活力 注意：实验中为了消除非酶促反应引起的淀粉水解带来的误差，每组实验都 做了相应的对照实验， 在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以 校正。 在实验中要严格控制温度及时间，以减小误差。并且在酶的作用过程中，三 支测定管及空白管不要混淆。 三、材料、试剂与仪器 实验材料： α-淀粉酶 仪器：分光光度计、电热恒温水浴锅、小台秤、研钵、玻璃仪器若干 试剂： ① 0.4M NaOH/0.4M CH 3COOH 及 0.1M HCl ： ② 0.005%工作碘液： 0.5 克 I 和 5.0 克 KI 水中研磨，定容至 1000mL； 2 ③ 1%糊化淀粉溶液：称取 1.0 克淀粉，加入 25mL0.4M NaOH，60℃5min ，冷 却后加 25mL0.4M CH 3COOH ，定容至 100mL； ④ 稀释 α-淀粉酶溶液：待测样品 四、实验步骤 ① 10mL1%淀粉溶液加入试管中，室温 25/45/65℃保温 10min ②于每管中各加酶稀释液 1mL，在室温 25/45/65℃恒温水浴中 （水浴温度的 变化不应超过± 0.5℃）准确加热 10min，冷却。 ③加 1mL1M 盐酸终止反应。 ⑤ 取上述混合液 1mL 加入预先装好 10mL 工作碘液的试管，摇匀。 ⑥ 660nm 测吸光度（蒸馏水调零） ，记录数据。 （注：吸光度测定勿漏空白对照 组） 对照组为不加酶液，加相应体积的水 五、数据整理及计算 温度（℃） 25