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临床基因扩增检验操作规范
浙江省基因诊断中心
浙江大学医学院附属儿童医院
尚世强
临床基因扩增检验实验室的
规范化设置及其各室的功能
各阶段操作要求
PCR污染与对策
四、因操作欠规范导致的问题分析
临床基因扩增检验实验室的
规范化设置及其各室的功能
规范化设置:
要求参照《临床基因扩增检验实
验室管理暂行办法》(卫医发[2002]10
号文)附件《临床基因扩增检验实验
室基本设置标准》。
1.四个隔开的工作区域中每一区域都须有
专用的仪器设备
2.明确的标记,如加样器或试剂等
3.单一方向顺序,从试剂贮存和准备区、标本
制备区、扩增反应混合物配制和扩增区(简
称扩增区)至产物分析区
4.使用不同颜色或有明显区别标志的工作服。
5.实验室的清洁应按试剂贮存和准备区至扩增
产物分析区的方向进行
6.各自的清洁用具
各室功能
含反应混合液的离心管或试管在冰冻前都
应快速离心数秒
戴手套
工作结束后必须立即对工作区进行清洁
实验台表面,使用可移动紫外灯(254nm波长)
照射,一般照射过夜
实验室及其设备的使用必须有日常记录。
二)标本制备区
功能
临床标本的保存,核酸(RNA、
DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应
管和测定RNA时cDNA的合成。
要正确使用加样器
正压条件避免从邻近区进入本区的气溶胶污染
为避免样本间的交叉污染,加入待测核酸后,必
须盖好含反应混合液的反应管。
对具有潜在传染危险性的材料,必须有明确的样
本处理和灭活程序
用过的加样器吸头必须放入专门的消毒容器内
用于RNA扩增检测的样本制备好以后,应立即进
行cDNA合成
三)扩增区
功能
DNA或cDNA扩增
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