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Seminar I 蛋白质芯片研究进展 高雁 指导老师:林炳承研究员  内容提要 蛋白质芯片概述 蛋白质芯片的关键技术 蛋白质芯片的应用 展望  蛋白质芯片的定义 基因芯片 生物芯片 蛋白质芯片,又称蛋白质阵列 蛋白质芯片 或蛋白质微阵列,是指以蛋白质 分子作为配基将其有序地固定 在固相载体的表面形成微阵列; 微流控芯片用标记了荧光的蛋白质或其他它 分子与之作用,洗去未结合的成 Labeled detection antibody 分,经荧光扫描等检测方式测定 芯片上各点的荧光强度,来分析 Printed pe 蛋白之间或蛋白与其它分子之间 的相互作用关系。 Markus f, et al., DDT, 2002, 7, 815-822 teiN Bertone P,et al FEBS Journal, 2005, 272, 5400-5411  研究蛋白质芯片的意义 @蛋白质是基因表达的最终产物,接近生命活动的物 质层面; @探针蛋白特异性高、亲和力强,可简化样品前处理, 甚至可直接利用生物材料(血样、尿样、细胞及组 织等进行检测 @适合高通量筛选与靶蛋白作用的化合物; @有助于了解药物或毒物与其效应相关蛋白质的相 互作用。  蛋白质芯片的分类 會會 蛋白质检测芯片 Proceiniposome 蛋白质功能芯片 E2M5b悉 Poetz o et al, Mechanisms of geing and Development, 2005, 126, 161-170  蛋白质芯片的关键技术 提出生物学问题 蛋白质芯片制备 实验目的) 6数据分析和建模 样品预处理 (图象量化,标准化 (重组蛋白,制备一、二级抗体, 采集蛋白信息,建立模型) 荧光标记,配蛋白印记缓冲液) 检测 生化反应 (荧光和比色扫描或拍照, 化学偶合,加底物 参数设置) 反应温度和时间 冲洗条件 Schena M, Protein microarrays, 2005, 7  蛋白质芯片的制备 1.固相载体及其处理4固定微阵列上的蛋 (滴定板、滤膜、凝胶、载 白样点 膜为载体:芯片放入湿盒, 2蛋白质的预处理 37°c1h 选择具有较高纯度和完好生物活 载玻片为载体:化学修饰产生醛 性的蛋白进行溶解 基固定蛋白 3.点制微阵列 5微阵列的封闭 夏律摆阵列的商品化主要封闭试剂:BsA或aGy 李瑶,基因芯片与功能基因组,2004,32-33  蛋白质芯片比较 表面 蛋白固定方式 优点 缺点 吸附 无需蛋白修饰过程,高结合容量非特异吸附,分布随机 Nitrocellulose 吸附 无需蛋白修饰过程,高结合容量非特异吸附,高背景,低密度 Poly-lysine coated吸附,共无需蛋白修饰过程,高密度, 非特异吸附,分布随机 Aldehyde-coated价偶联 高分辨检测 Epoxy-activated 高密度,高分辨检测 分布随机,表面有吸附 PDMS nanowell共价高密度,适合复杂的生化分析 Go| d coated silicon郾 高密度,低背景,易与SPR或Ms联用分布随机,制作难,未商品化 Avidin coated亲和结合蛋白连接强度高、特异和高密度,低背景蛋白需生物素化 Ni-NTA coated亲和结合蛋白连接强度高、特异和高密度,低背景蛋白需HsX6标记 表面蛋白分布均一容量 Agarose thin film 制作难,未商品化 3D gel pad 散无需蛋白修饰过程,高结合容量 Zhu Het. al, Current Opinion in chemical Biology, 2003, 7, 55-63  蛋白质芯片检测 无探针标记检测法 磷嘛器详删日表面增强激光解吸离子化技术 (Surface enhanced laser Proteinchip array mical, biochemical, or biological aHf ity capture surface desorption/ionization, SELDI 口表面等离子体共振检测技术 (surface plasmon resonance, SPR) Sample flaw 口原子力显微镜检测技术 (atomic force microscope, AFM)  蛋白质芯片的应用 ◆疾病诊断和预警 ◆药物开发 ◆蛋白质组学