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纸色谱操作技术 纸色谱操作技术主要包括四个步骤:色谱滤纸的准备、点样、展开、斑点的定位。 一、色谱滤纸准备 用于下行法的色谱滤纸取色谱滤纸按纤维长丝方向切成适当大小的纸条，离纸条上端适当的距离，使色谱滤纸上端能足够浸入溶剂槽内的展开剂中，并使点样基线能在展开剂槽两侧的玻璃支持棒下数厘米处，用铅笔划一点样基线，如下图1-a所示，必要时，可在色谱滤纸下端切成锯齿形便于展开剂向下移动。 用于上行法的色谱滤纸色谱滤纸长约25cm，宽度则按需要而定，必要时可将色谱滤纸卷成筒形；点样基线距底边约2.5cm。 二、点样 将样品溶解于适宜的溶剂中制成一定浓度的溶液。用定量毛细管或微量注射 器吸取溶液，点于点样基线上，一次点样量不超过10μl，如下图1-b所示。点样量过大时，溶液宜分次点加，每次点加后，使其自然干燥、低温烘干或经温热气流吹干，样点直径为2～4mm，点样量取决于色谱滤纸的薄厚程度和显色剂的灵敏度，一般几到几十微克。点间距离约为1.5～2.0cm，样点通常为圆形，也可点成条形。应能使点样位置正确、集中。 a b 图1 纸色谱的划线（a）与点样(b) 三、展开 纸色谱最常用的展开方式是下行展开法和上行展开法，也可像薄层色谱一样 有双向展开、多次展开、连续展开或径向晨开等展开方式。 下行展开法将点样后的色谱滤纸的点样端放在展开剂槽内并用玻棒压住，使色谱滤纸通过槽一侧从而滤纸自然下垂，点样基线在支持棒下数厘米处。展开前，应使展开缸内展开剂的蒸汽达到饱和。一般可在展开缸底部放一装有展开剂的平皿或被展开剂润湿的滤纸条附着在展开缸内壁上，放置一定时间，让展开剂挥发使缸内充满饱和蒸汽。然后小心添加展开剂至展开剂槽内，使色谱滤纸的上端浸没在槽内的展开剂中，展开剂即经毛细管作用沿色谱滤纸移动进行展开，展开至规定的距离后，取出色谱滤纸，标明展开剂前沿位置，待展开剂挥散后检视。如图2所示。 上行展开法点样方法同下行法。展开缸内加入展开剂适量，放置，让展开剂蒸气饱和后，再下降悬钩，使色谱滤纸浸入展开剂约lcm，展开剂即经毛细管作用沿色谱滤纸上升，如图3所示，展开至规定距离后，取出色谱滤纸晾干，按规定方法检视。 图2纸色谱下行展开示意图 图3 纸色谱上行展开示意图 四、斑点定位 纸色谱法斑点的定位基本和薄层色谱法相似，但纸色谱法不能使用腐蚀性显色剂，也不能在高温下显色。 1.荧光检出法 对无色物质可在紫外光灯（254nm或365nm）下，观察纸上有无暗斑或荧光斑点，并记录其颜色、位置及强弱。有荧光的物质或显色后可激发产生荧光的 物质可在紫外光灯（254nm或365nm）下观察荧光斑点。 2.化学检出法 利用化学试剂（显色剂）与被测物质反应，使斑点产生颜色而定位。显色方法可采用喷雾法、熏蒸法或浸渍法。显色时应确保均匀。 图4 纸色谱斑点的显色