仪器分析技术 凝胶柱色谱法基础知识 凝胶柱色谱法基础知识.docVIP

凝胶柱色谱法基础知识 一、凝胶柱色谱法定义 凝胶柱色谱法也称空间排阻色谱、分子排阻色谱，是按分子尺寸的差异进行分离的一种液相色谱方法。 二、分离原理 其分离原理为凝胶色谱柱的分子筛机制。色谱柱多以亲水硅胶、凝胶或经过修饰的凝胶如葡聚糖凝胶（Sephadex)和琼脂糖凝胶（Sepharose) 等为填充剂，这些填充剂表面分布着不同孔径尺寸的孔，药物分子进人色谱柱后，它们中的不同组分按其分子大小进人相应的孔内，大于所有孔径的分子不能进人填充剂颗粒内部，在色谱过程中不被保留，最早被流动相洗脱至柱外，表现为保留时间较短；小于所有孔径的分子能自由进人填充剂表面的所有孔径，在色谱柱中滞留时间较长，表现为保留时间较长；其余分子则按分子大小依次被洗脱。分离过程如图1所示。 图1凝胶色谱分离过程 三、固定相 常用固定相有以下几类。 1.无机凝胶 又称硬质凝胶，是具有一定孔径范围的多孔性凝胶，如多孔硅胶、多孔玻璃珠等此类凝胶化学惰性、稳定性及机械强度均好，耐高温，使用寿命长，但装柱时易碎，不易装紧，柱分离效能较低。 2.有机凝胶 又称半硬质凝胶。如苯乙烯二乙烯苯交联共聚物凝胶，能耐较高压力，适用于有机溶剂作流动相，有一定可压缩性，可填得紧密，柱分离效能较高。但在有机溶剂中有轻度膨胀。 3.新型凝胶 新型凝胶色谱填料，是无机填料表面键合亲水性单分子层或多层覆盖的单糖或多糖型等填料，如交联葡聚糖凝胶，其粒度细，机械强度高，分离速度快，效果好，克服了传统软填料的一些弱点，广泛用于生物大分子的分离。 四、流动相 流动相必须与凝胶本身非常相似，能溶解样品，浸润凝胶，且具有较低的黏度，有利于大分子的扩散。常用的流动相有四氢呋喃、甲苯、Ⅳ，N-=甲基甲酰胺、三氯甲烷和水等。以水溶液为流动相的凝胶色谱适用于水溶性样品的分析，以有机溶剂为流动相的凝胶色谱适用于非水溶性样品。